[发明专利]一种空肠弯曲菌荧光定量PCR检测试剂盒及其检测方法无效
| 申请号： | 201010118477.1 | 申请日： | 2010-03-05 |
| 公开（公告）号： | CN101886120A | 公开（公告）日： | 2010-11-17 |
| 发明（设计）人： | 蒋原;祝长青;薛峰;栾军;邵景东;陈国强;唐泰山;张常印;张睿;沈崇钰;吴斌 | 申请（专利权）人： | 江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;G01N21/64 |
| 代理公司： | 南京众联专利代理有限公司 32206 | 代理人： | 王荷英 |
| 地址： | 210001*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 空肠 弯曲 荧光 定量 pcr 检测 试剂盒 及其 方法 | ||
1.一种空肠弯曲菌荧光定量PCR基因检测试剂盒，包括如下试剂：
(1)PCR MIX反应液：5×FQ PCR buffer、浓度为10uM的引物混合物、浓度为10uM的TaqMan探针混合物、浓度为10mM的dNTPs和ddH2O，其中所述引物混合物中含有：16S rRNA上游引物F、16S rRNA下游引物R、上游引物hipO-F和下游引物hipO-R，TaqMan探针混合物中含有：16S rRNA-P和hipO-P；
所述16S rRNA上游引物F序列为：5’-TGCTTAACACAAGTTGAGTAGG-3’；
所述16S rRNA下游引物R序列为：5’-TTCCTTAGGTACCGTCAGAA-3’；
所述上游引物hipO-F序列为：5’-TAGGACTTCGTGCAGATATGG-3’；
所述下游引物hipO-R序列为：5’-AATCCATCTTCTATCATTGCCT-3’；
所述16S rRNA-P序列为：5’-AACCCTGACGCAGCAACGCCGC-3’，其5’端标记荧光报告基团，3’端标记荧光淬灭基团；
所述hipO-P序列为：5’-AGCACCACCCAAACCCTCTTCAGC-3’，5’端标记荧光报告基团，3’端标记荧光淬灭基团。
(2)Taq酶；
(3)阳性标准品和阴性标准品，所述阳性标准品是浓度为1×107copies/mL的目的片段重组质粒。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述PCR MIX反应液中所述5×FQ PCR buffer、引物混合物、TaqMan探针混合物、dNTPS和ddH2O的体积混合比为10∶1∶0.5∶1∶30.5。
3.一种用权利要求1或2所述试剂盒检测空肠弯曲菌的方法，包括如下步骤：
(1)样品及阳性对照的DNA提取
(2)反应体系中含有：PCR MIX反应液24μL、Taq酶2μL，样品DNA提取液4μL，阳性模板为重组质粒，阴性模板为ddH2O；反应程序为：93℃反应2min，93℃反应30s，58℃反应45s，45个循环。
(3)结果分析：Ct值小于35个循环且呈S型扩增曲线的为阳性，即样品中有空肠弯曲菌。
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