[发明专利]一种定向催化合成胞苷磷酰化合物的方法

权利要求书

1.一种定向催化合成胞苷磷酰化合物的方法，其特征在于以CMP、氯化胆碱和磷酸根离子为底物，以葡萄糖作为能量供体，利用有透性的微生物细胞为酶源，通过改变反应温度为手段，促使反应体系生物催化合成胞苷磷酰化合物；

其中，所述胞苷磷酰化合物为胞苷二磷酸、胞苷三磷酸或CDP-胆碱，其结构式如下：

其中，所述的微生物细胞是指能够利用CMP合成CDPC的微生物，包括气杆菌属、埃希氏菌属、赛氏杆菌属、微球菌属的细菌；酵母属、假丝酵母属、毕赤酵母属、球拟酵母属、德巴利酵母属、接合酵母属、克鲁维酵母属、汉逊酵母属和酒香酵母属的酵母；

其中，所述的有透性的微生物细胞是指通过化学、物理或生物方法处理过的细胞膜的通透性改变过的微生物细胞，具体方法包括表面活性剂法、有机溶剂法、冻融法、超声波处理法、风干法、冷冻干燥法或溶菌酶法；

其中，表面活性剂法中使用的表面活性剂为非离子型表面活性剂、阳离子型表面活性剂或者阴离子表面活性剂，使用量为0.1～50g/L。

其中，有机溶剂法中使用的有机溶剂为二甲苯、甲苯、脂肪醇、丙酮或乙酸乙酯，使用量为0.1～50mL/L；

其中，在pH5～10的水溶液中进行如下三种反应之一，定向合成胞苷磷酰化合物：

(a)在28～40℃下，反应3小时，主要产物为CTP；

(b)在28～40℃下，反应3小时；再调整温度至28～34℃，反应9～15小时，主要产物为CDPC； 

(c)在28～40℃下，反应3小时；再调整温度至28～34℃，反应9～15小时；再调整温度至20～27℃，反应6～10小时，主要产物为CDP。

2.根据权利要求1中任意一项所述的定向催化合成胞苷磷酰化合物的方法，其特征在于底物CMP的起始反应浓度为10～100mmol/L，氯化胆碱的起始反应浓度为10～300mmol/L，磷酸根离子的起始反应浓度为0.1～2mol/L，葡萄糖的起始反应浓度为0.1～1mol/L，微生物细胞的加入量为按湿菌体计100～800g/L。

3.根据权利要求1中任意一项所述的定向催化合成胞苷磷酰化合物的方法，其特征在于所述的反应体系还加入Mn²⁺离子和二硫苏糖醇的组合物；Mn²⁺起始反应浓度为1～200mmol/L，二硫苏糖醇起始反应浓度为1～200mmol/L。