[发明专利]从黑木耳中分离制备β-葡聚糖的方法

说明书

技术领域

本发明属于食品加工技术领域，涉及黑木耳深加工技术，特别是从黑木耳中分离制备β-葡聚糖的方法。 

技术背景

黑木耳具有清肺、益气补血等功效。现代医学证明黑木耳中的多糖具有增强人体免疫力，防癌抗癌和防止血栓的形成等功能。β-葡聚糖是多糖中的一种，其活性结构是由葡萄糖单位组成的多聚糖，它们大多数通过β-1，3结合，这是葡萄糖链连接的方式。它能够活化巨噬细胞、嗜中性白血球等，因此能提高白细胞素、细胞分裂素和特殊抗体的含量，全面刺激机体的免疫系统。因此β-葡聚糖具有重要的应用价值。采用高速逆流色谱方法从黑木耳中分离制备β-葡聚糖高分子未见文献报道。 

现有的关于β-葡聚糖的分离纯化方法主要是采用凝胶色谱，其局限性是分离成本高，分离速度慢。其次，凝胶色谱回收率低，再生使用相对困难，难以发展成为制备量大的分离技术。 

发明内容

本发明的目的是提供一种成本较低、效率高的从黑木耳中分离制备β-葡聚糖的方法。为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：采用热水(100℃)浸提黑木耳中的多糖成分；用醇沉的方法对浸提得到提取物进行初步纯化，得到黑木耳多糖粗提物；以逆流色谱仪为分离设备分离纯化黑木耳多糖粗提物中的β-葡聚糖，其溶剂系统由常温常压下处于固体的聚乙二醇1000、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和处于液体的水组成。先将聚乙二醇1000的溶液达到饱和，再通过添加磷酸二氢钠和磷酸氢二钠使聚乙二醇1000饱和溶液分层，磷酸二氢钠、磷酸氢二钠的用量重量比为1∶3～3∶1。上相做固定相，下相做流动相。用截留分子量为20kDa的透析袋流水透析去除溶剂中的磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和聚乙二醇1000，得到β-葡聚糖水溶液，冷冻干燥即得β-葡聚糖粉末。操作步骤如下： 

(1)采用沸水浸提黑木耳干粉中的多糖，得到黑木耳多糖提取液； 

(2)将黑木耳多糖提取液真空浓缩至含固形物质量分数40％-50％； 

(3)在上述浓缩液中加入5-10倍体积的无水乙醇，得到醇沉多糖，将其真空浓缩干燥，得到固体黑木耳多糖提物； 

(4)采用逆流色谱方法分离纯化黑木耳多糖提取物； 

(5)收集逆流色谱分离的β-葡聚糖组分，用截留分子量为20kDa的透析袋流水透析去除溶剂中的磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和聚乙二醇1000，得到β-葡聚糖水溶液； 

(6)将β-葡聚糖水溶液真空浓缩至固形物质量分数达到60％以上，再采用冷冻干燥，得到纯化的β-葡聚糖粉末。 

步骤(1)所述的浸提过程是：采用沸水浸提溶剂与黑木耳干粉的液料体积比为5～10∶1，条件为温度100℃，浸提时间2小时，浸提次数2～3次。 

步骤(2)和步骤(3)所述真空浓缩的真空度低于0.09Mpa，温度为50～60℃。 

步骤(4)所述逆流色谱方法为：采用逆流色谱仪为分离设备，溶剂系统由常温常压下处于固体的聚乙二醇1000、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和处于液体的水组成；先用水溶解聚乙二醇1000，使溶液达到饱和，再添加磷酸二氢钠和磷酸氢二钠使聚乙二醇1000饱和溶液分层，磷酸二氢钠、磷酸氢二钠的使用重量比为1∶3～3∶1；上相做固定相，下相做流动相；用泵将上述溶剂系统的上相注入逆流色谱仪的色谱柱，并取上述溶剂系统的部分上相溶解固体黑木耳多糖提物制备逆流色谱样品溶液；开启逆流色谱仪和流动相输液泵，将样品溶液和流动相输入逆流色谱分离柱；部分收集器收集流出组分，用薄层层析的方法检测各组分，并收集β-葡聚糖组分。 

步骤(4)所述逆流色谱方法所用的逆流色谱仪为高速逆流色谱仪HSCCC。 

步骤(6)所述冷冻干燥的真空度低于50Pa，温度低于-35℃。 

附图说明

图1为本发明的工艺流程图。 

图2为实施例1的HSCCC分离图谱。Fraction II：β-葡聚糖组分。 

图3为实施例2的HSCCC分离图谱。Fraction II：β-葡聚糖组分。 

图4为实施例3的HSCCC分离图谱。Fraction II：β-葡聚糖组分。 

具体实施方式

实施例1