[发明专利]一种基于酶联免疫法的快速检测系统

说明书

技术领域

本发明涉及一种基于酶联免疫法的快速检测系统及其检测方法，本发明还涉及一种可包被反应物的固相载体。

背景技术

本发明的基本理论体系是利用酶联免疫法(ELISA)中的双抗体夹心法测定未知抗原。将抗原免疫动物获得的抗体吸附于固相表面，加抗原，形成抗原-抗体复合物；加与前一步同样的抗体，形成抗体-抗原-抗体复合物，再加入酶标标记物；加入底物，结果判定：有色产物的生成量与抗原量成正相关。

现有酶联免疫试剂盒的基本特征是：将抗原或抗体固定在固相载体上制成微孔板，利用酶标记的抗原或抗体及底物，检测样品中与固相载体上的抗原或抗体相应的抗原或抗体。传统材质一般采用聚苯乙烯作为免疫吸附的载体，具有一定的局限性，其包埋率及亲水性都有限，所以对样品的前期处理要求严格，耗费大量时间，需要专业的技术人员和实验室环境，在产品的使用操作和检测灵敏度方面都受到了很大的限制，而且作为不可降解的传统聚苯乙烯塑料，不利于环保。试剂盒通常设计为96孔或48孔的板状，微孔板在操作上十分不便，样品容易混淆，用肉眼辨别微孔上的变化容易误判，若样品数量较少则会造成微孔的闲置浪费。并且所有操作不能为普通使用者所掌握。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种基于酶联免疫法的快速检测系统。

本发明的第二个目的是提供上述检测系统的检测方法。

本发明的第三个目的是提供一种可包被反应物的固相载体。

本发明采用的技术方案是：

一种基于酶联免疫法的快速检测系统，包括置于一个检测盒中的以下组件：a、检测构件；b、用于放置目标样品的空瓶；c、装有经冷冻干燥后抗体的试剂瓶；d、装有酶标标记物的试剂瓶；e、装有用于定性的底物的试剂瓶；f、装有用于定量的底物的试剂瓶；g、装有缓冲溶液的试剂瓶。

所述检测构件为包被有抗体的固相载体，并套有一个比色杯。

该固相载体的基质主体为聚羟基丁酸酯，其基质里还嵌入带有活性功能团的化合物。

此化合物为聚氨基酸，嵌入的聚氨基酸与聚羟基丁酸酯基质的质量比为(0.1-8)∶100。

聚氨基酸为聚天门冬氨酸、聚赖氨酸或聚谷氨酸。

所述以聚羟基丁酸酯为基质主体的固相载体形状为棒状，即检测棒。

所述检测棒的制备方法为：将聚氨基酸与聚羟基丁酸酯按(0.1-8)∶100的质量比混合均匀后，送入压塑机在110-210℃的加工温度下进行压塑并制成珠粒状，然后再将珠粒状压塑物通过常规工艺制成棒状，即得。

所述抗体可为任何种类的免疫球蛋白IgG，所述抗体的包被方法为：首先将抗体以20μg/ml溶于磷酸盐缓冲溶液，将检测棒浸入到抗体溶液中，放入冰箱冷藏过夜；然后取出检测棒，再将其浸入封闭液中，封闭液为溶有体积浓度1％的Tween20的磷酸盐缓冲溶液，室温下静置两小时后，取出自然晾干；检测棒套入比色杯中，2-8℃冷藏保存。

所述装有经过冷冻干燥后的抗体的试剂瓶的制备方法为：将抗体以1mg/ml溶于磷酸盐缓冲溶液，取20μl注入试剂瓶中，放入冷冻干燥器中过夜冻干，取出后2-8℃冷藏保存；

所述装有酶标标记物试剂瓶的制备方法为：将1mg金黄色葡萄球菌蛋白A偶联碱性磷酸酶保存于1ml的50×10^-3mol/L Tris溶液中，然后再加入氯化镁、氯化锌、牛血清蛋白、甘油和叠氮化钠，使氯化镁达到1.0×10^-3mol/L、氯化锌达到0.1×10^-3mol/L、牛血清白蛋白的体积浓度达到1％、甘油的体积浓度达到50％和叠氮化钠达到15×10^-3mol/L，调pH值为8.0，即得工作浓度为1mg/ml的金黄色葡萄球菌蛋白A偶联碱性磷酸酶；取0.4μl注入试剂瓶中，2-8℃冷藏保存；

所述用于定性测量的底物为5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐(BCIP)与氯化硝基四氮唑蓝(NBT)的混合液，所述装有底物试剂瓶的制备方法为：将摩尔浓度为4.8×10^-4mol/L的BCIP和摩尔浓度为5.1×10^-4mol/L NBT混合，然后取1ml混合液注入试剂瓶中，2-8℃冷藏并避光保存；

所述用于定量测量的底物为溶于体积浓度为10％的二羟乙基胺的硝基苯磷酸盐，所述硝基苯磷酸盐的质量浓度为1.0mg/ml，所述溶液的pH值为9.5，然后取1ml混合液注入试剂瓶中，2-8℃冷藏并避光保存；