[发明专利]应用倾斜旋转瓶进行微载体细胞培养的方法

权利要求书

1.一种应用转瓶、可以进行倾斜旋转重力混合生物反应试验的装置于31℃～39℃进行大规模微载体细胞培养方法。

2.根据权利要求1所述的倾斜旋转瓶大规模微载体细胞培养方法，其所用的转瓶可为3L转瓶、15L转瓶等细胞培养转瓶，使用前可对转瓶内部进行浓硫酸重铬酸钾浸泡过夜后清洗晾干清洁处理，并可进行硅化处理以减少细胞和微载体在转瓶内壁的吸附。

3.根据权利要求1～2中任意一项所述的倾斜旋转瓶大规模微载体细胞培养方法，其所用的转瓶在每次使用前可进行干热灭菌、NaOH溶液处理，以除去热源。

4.根据权利要求1所述的倾斜旋转瓶大规模微载体细胞培养方法，其所用的微载体可为球状微载体、片状微载体，按照相应的方法水化处理后，装在转瓶内灭菌，接种细胞前，可用预温处理的含有血清等的DMEM、MEM/F12等细胞培养液洗涤1～5次；也可在灭菌前用不含谷氨酰胺的DMEM等溶液洗涤微载体1～5次后高压蒸汽灭菌，接种细胞前补加谷氨酰胺、血清等。

5.根据权利要求1所述的倾斜旋转瓶大规模微载体细胞培养方法，其待接种的细胞经胰蛋白酶等消化成单细胞悬液后，按照每10⁷个细胞接种500～5000cm²的微载体的接种量进行细胞接种，接种的细胞可为地鼠肾细胞等原代细胞，Vero细胞等传代细胞，MRC-5细胞、2BS细胞等人二倍体细胞，补加培养基至培养体积。

6.根据权利要求1所述的倾斜旋转瓶大规模微载体细胞培养方法，其接种细胞后，放置于37℃温室或温箱内的倾斜旋转重力混合生物反应装置进行5～80度倾斜旋转培养，旋转速度为1～300转/分钟。根据细胞生长情况，以1次/4天～4次/1天换液频率进行更换细胞培养液。培养5～15天细胞长满微载体。

7.根据权利要求1所述的倾斜旋转瓶大规模微载体细胞培养方法，其长满微载体的细胞，可进行单抗的目的蛋白的表达；可接种病毒于31℃～39℃温室或温箱内5～80度倾斜旋转培养进行病毒扩增培养；可用于作为更大规模培养的细胞种子。

8.根据权利要求1所述的倾斜旋转瓶大规模微载体细胞培养方法，其微载体和细胞为旋转过程中依靠重力主动沉降混合，具有较低的剪切力。

9.根据权利要求1所述的倾斜旋转瓶大规模微载体细胞培养方法，其培养过程中除了定期换液，可不做任何在线检测，可不做任何在线补加氧气、氮气、二氧化碳气体、压缩空气、酸、碱等操作。