[发明专利]一种利用毕赤酵母制备酵母氨基酸的方法

说明书

技术领域

本发明属于废弃生物资源开发利用领域，特别是指一种利用废弃毕赤酵母制备酵母氨基酸的方法。

背景技术

随着生物学技术的发展，利用基因工程菌生产生物产品已成为现实。巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统是目前最优秀、应用最广泛的外源基因表达系统之一。目前许多产品，如植酸酶、木聚糖酶、甘露聚糖酶等都在巴斯德毕赤酵母中获得高效表达，并实现了这些产品的大规模工业化生产。利用工程菌高密度培养生产这些产品的同时会产生大量的菌体，约占发酵液体积的30-40％。以一个年产10000吨的植酸酶企业计，可产生废弃毕赤酵母约1000吨(以干物质计)，但是目前缺乏废弃毕赤酵母的再利用的研究和应用，造成生物资源的浪费，而且废弃毕赤酵母的排放还会对环境造成污染。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术存在的缺点和不足，而提供一种利用毕赤酵母制备酵母氨基酸的方法对，通过废弃毕赤酵母生产酵母氨基酸，用作饲料添加剂或叶面肥，不仅可实现废弃物的资源化利用，并可减少对环境的污染。

为实现上述目的，本发明的技术方案是包括以下步骤，

(1)收集毕赤酵母，收集毕赤酵母泥或者毕赤酵母粉；

(2)调浆：加水使酵母细胞干重达到8％～15％，调pH至4.5～5.0；

(3)酶解破壁：添加破壁酶0.5‰～1.0‰，酶解温度50℃～60℃，酶解时间12～15h；

(4)二次调浆：调pH至5.5～7.5；

(5)蛋白酶解：添加蛋白酶0.3‰～0.5‰，酶解温度，40℃～50℃，酶解时间20～24h；

(6)去除不溶物：通过高速离心机离心或者膜过滤去除沉淀物；

(7)浓缩：采用减压真空浓缩使固形物含量达到30％～50％；

(8)干燥，获得酵母氨基酸。

所述的破壁酶包括但不局限于葡聚糖酶、甘露聚糖酶、纤维素酶或溶菌酶中的一种多种组合。所述的蛋白酶包括但不局限于酶性蛋白酶、中性蛋白酶或碱性蛋白酶中的一种或多种组合。

进一步设置是所述的步骤(8)采用喷雾干燥方式，其进风温度为150℃～200℃，出风温度为75℃～95℃。本设置还可以是采用滚筒干燥方式进行。

本发明工艺简单，产品形态理想，利用本发明制备的酵母氨基酸经检测，很好地保留了酵母原有的营养和功能成分，分子量在一万以下的肽及氨基酸含量占总蛋白的80％，还含有一定量的低聚糖。

本发明操作方便、连续性好、处理量大，易实现工业化生产，基本解决了废弃毕赤酵母难以处理的技术屏障。随着生物技术产业的发展，利用毕赤酵母表达的产品越来越多，产生的废弃毕赤酵母的量也越来越大，利用废弃毕赤酵母制备酵母氨基酸，根据其卫生程度可作为功能性产品原料用于饲料行业或生物肥料行业，具有巨大的经济效益和市场开发前景。

下面结合说明书附图和具体实施方式对本发明做进一步介绍。

附图说明

图1本发明工艺流程图；

具体实施方式

下面通过实施例对本发明进行具体的描述，只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限定，该领域的技术工程师可根据上述发明的内容对本发明作出一些非本质的改进和调整。

实施例1

植酸酶生产废弃毕赤酵母1kg加水9kg，调pH至5.5，加入0.6‰的破壁酶(葡聚糖酶∶纤维素酶＝1∶1)，40℃酶解12h，再调pH至6.5，加入0.3‰中性蛋白酶，45℃酶解24h，高速离心去除沉淀，上清液真空浓缩至固形物含量达到35％进行喷雾干燥，进风温度为160℃，出风温度为82℃，得酵母氨基酸产品460g。

实施例2

植酸酶生产废弃毕赤酵母1kg加水12.5kg，调pH至5.5，加入0.6‰的破壁酶(葡聚糖酶∶纤维素酶∶甘露聚糖酶＝1∶1∶1)，40℃酶解12h，再调pH至6.5，加入0.3‰中性蛋白酶，45℃酶解24h，高速离心去除沉淀，上清液真空浓缩至固形物含量达到35％进行喷雾干燥，进风温度为160℃，出风温度为82℃，得酵母氨基酸产品506g。

实施例3

植酸酶生产废弃毕赤酵母1kg加水9kg，调pH至5.5，加入0.6‰的破壁酶(葡聚糖酶∶纤维素酶∶甘露聚糖酶＝1∶1∶1)，40℃酶解14h，再调pH至6.0，加入0.5‰木瓜蛋白酶，45℃酶解22h，高速离心去除沉淀，上清液真空浓缩至固形物含量达到35％进行喷雾干燥，进风温度为160℃，出风温度为82℃，得酵母氨基酸产品482g。

实施例4