[发明专利]在来源于CHO细胞的糖蛋白产物中的含有半乳糖-α-1,3-半乳糖的N-聚糖

权利要求书

1.一种用于评估中国仓鼠卵巢(CHO)细胞群的方法，该方法包括：

(a)提供来自该群的一个或多个CHO细胞；并且

(b)测量由所述细胞产生的包含末端半乳糖-α-1-3-半乳糖残基的聚糖，

其中这些CHO细胞没有被基因工程化以表达α-半乳糖苷转移酶编码序列。

2.如权利要求1所述的方法，其中该测定步骤包括以下步骤中的任何步骤：

(a)分离由这些CHO细胞产生的糖蛋白，并且测量这些糖蛋白上包含末端半乳糖-α-1-3-半乳糖残基的这些聚糖，

(b)分离由这些CHO细胞产生的特异性糖蛋白成分，并且测量来自该分离的糖蛋白成分的包含末端半乳糖-α-1-3-半乳糖残基的聚糖，

(c)从分离的由这些CHO细胞产生的糖蛋白或一种糖蛋白制剂获得聚糖制剂，并且测量该聚糖制剂中包含末端半乳糖-α-1-3-半乳糖残基的聚糖，

(d)从由CHO细胞产生的糖蛋白上存在的聚糖或者从该一个或多个CHO细胞的表面上的聚糖切割单糖，并且检测来自些切割的单糖的末端释放的α-半乳糖残基。

(e)提供来自由这些CHO细胞产生的糖蛋白制剂的至少一种肽，并且测量在该至少一种肽上的包含末端半乳糖-α-1-3-半乳糖残基的聚糖，并且

(f)测量包含末端半乳糖-α-1-3-半乳糖残基的聚糖，其来自该一个或多个CHO细胞的细胞表面上的聚糖。

3.如权利要求1所述的方法，其中该CHO细胞群是一种克隆细胞群。

4.如权利要求1所述的方法，进一步包括将步骤(b)中的测量水平与一种参比水平或规格进行比较的一个步骤。

5.如权利要求1所述的方法，其中的测量包括使用选自下组的一种方法来对包含末端半乳糖-α-半乳糖残基的聚糖进行鉴定或定量，该组由下列各项组成：色谱法、质谱(MS)法、电泳法、核磁共振(NMR)法、单糖分析、荧光法、UV-VIS吸收法、酶法、检测分子的使用、以及它们的组合。

6.如权利要求1所述的方法，其中该CHO细胞群是来自在用于制造治疗性糖蛋白的生物反应器中的细胞培养物的一种样品。

7.如权利要求1所述的方法，其中该提供和测量步骤随着时间的过去而被重复至少一次。

8.如权利要求1所述的方法，其中该测量步骤包括使用一种结合到半乳糖-α-1-3-半乳糖表位上的检测分子。

9.如权利要求8所述的方法，其中该检测分子包括一种能够结合到半乳糖-α-1-3-半乳糖表位上的凝集素。

10.如权利要求8所述的方法，其中该检测分子包括一种抗半乳糖-α-1-3-半乳糖表位的抗体。

11.如权利要求8所述的方法，其中该检测分子包括一个包含标记部分的分子或结合到其上。

12.如权利要求1所述的方法，进一步包括将测量步骤中的结果记录在打印或计算机可读介质中的步骤。

13.如权利要求1所述的方法，其中该CHO细胞群存在于细胞培养物中。

14.如权利要求1所述的方法，其中已经用编码人类治疗性糖蛋白的载体转化了这些CHO细胞。

15.如权利要求1所述的方法，进一步包括对存在于这些CHO细胞上的末端半乳糖-α-1-3-半乳糖表位或包含这些表位的聚糖的量进行定量的步骤。

16.如权利要求1所述的方法，其中测量包括分离由这些CHO细胞产生的糖蛋白，并且测量这些糖蛋白上包含末端半乳糖-α-1-3-半乳糖残基的聚糖。

17.如权利要求1所述的方法，其中测量包括分离由这些CHO细胞产生的特异性糖蛋白成分，并且测量来自分离的糖蛋白成分的包含末端半乳糖-α-1-3-半乳糖残基的聚糖。

18.如权利要求1所述的方法，其中测量包括从分离的由这些CHO细胞产生的糖蛋白或一种糖蛋白制剂获得聚糖制剂，并且测量该聚糖制剂中包含末端半乳糖-α-1-3-半乳糖残基的聚糖。

19.如权利要求1所述的方法，其中测量包括(d)从由CHO细胞产生的糖蛋白上存在的聚糖或者从该一个或多个CHO细胞的表面上的聚糖切割单糖，并且对末端进行检测。