[发明专利]制备能够形成包含体的蛋白的方法

权利要求书

1.一种核酸片段，其由编码表达于原核细胞时形成包含体的蛋白(包含体形成蛋白)的核苷酸序列组成，所述核酸片段包含编码修饰的信号肽的核苷酸序列和编码目的蛋白的核苷酸序列。

2.权利要求1的核酸片段，其中所述原核细胞是革兰氏阴性细菌。

3.权利要求1或者2的核酸片段，其中所述原核细胞是大肠杆菌(E.coli)。

4.权利要求1到3任一项的核酸片段，其中所述目的蛋白是原基质金属蛋白酶7(proMMP-7)或者C型副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum)的HMTp210。

5.权利要求1到4任一项的核酸片段，其中所述修饰的信号肽是修饰的来自原核生物的穿越内膜的蛋白的信号肽。

6.权利要求5的核酸片段，其中所述蛋白选自碱性磷酸酶、OmpA、PelB、OmpT、LamB、OmpF和β-内酰胺酶。

7.权利要求5的核酸片段，其中所述修饰的信号肽是修饰的PhoA-碱性磷酸酶的信号肽(修饰的APSP)。

8.权利要求7的核酸片段，其中所述修饰的APSP的氨基酸序列示于SEQ ID NO：1，其第13位的亮氨酸由选自脯氨酸、苯丙氨酸和色氨酸的任一氨基酸置换。

9.权利要求7的核酸片段，其中所述修饰的APSP的氨基酸序列示于SEQ ID NO：1，其第21位的丙氨酸由选自天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸的任一氨基酸置换。

10.权利要求7的核酸片段，其中所述修饰的APSP的氨基酸序列示于SEQ ID NO：1，其第13位的亮氨酸由选自脯氨酸、苯丙氨酸和色氨酸的任一氨基酸置换以及第21位的丙氨酸由选自天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸的任一氨基酸置换。

11.权利要求1到10任一项的核酸片段，其中编码目的蛋白的核苷酸序列置于编码所述修饰的信号肽的核苷酸序列的下游。

12.掺入了权利要求1到11任一项的核酸片段的表达载体。

13.用权利要求12的表达载体转化宿主获得的产生包含体形成蛋白的宿主。

14.权利要求13的产生包含体形成蛋白的宿主，其中所述宿主为原核细胞。

15.权利要求13或者14的产生包含体形成蛋白的宿主，其中所述宿主为革兰氏阴性细菌。

16.权利要求13到15任一项的产生包含体形成蛋白的宿主，其中所述宿主是大肠杆菌。

17.一种制备表达于原核细胞时形成包含体的蛋白(包含体形成蛋白)的方法，其包括以下步骤(1)到(3)：

(1)制备包含权利要求1到11任一项的核酸片段的表达载体，

(2)制备上面步骤(1)的所述表达载体转化的产生包含体形成蛋白的宿主细胞，和

(3)从培养上面步骤(2)的产生所述包含体形成蛋白的所述宿主细胞获得的培养物中纯化所述的包含体形成蛋白。

18.权利要求17的方法，其中所述表达载体是权利要求1-11任一项的核酸片段掺入到T7启动子下游的表达载体。

19.权利要求17或者18的方法，其中所述宿主是原核细胞。

20.权利要求17到19任一项的方法，其中所述宿主是革兰氏阴性细菌。

21.权利要求17到20任一项的方法，其中所述宿主为大肠杆菌。

22.权利要求17到21任一项的方法，其中产生所述包含体形成蛋白的所述宿主细胞培养于无抗生素的培养基中。