[发明专利]纤维素酶CEL5H相关试剂及其在微生物中的应用

权利要求书

1.一种重组细菌，其表达Saccharophagus degradans 2-40株的Cel5H多肽或其同源物，或所述Cel5H多肽或所述同源物的功能片段和/或变体，所述重组细菌能够降解纤维素。

2.根据权利要求1所述的重组细菌，其包含编码所述Cel5H多肽或其同源物的重组核酸分子，或编码所述Cel5H多肽或所述同源物的功能片段和/或变体的重组核酸分子，所述重组核酸分子可操作地连接至允许在所述微生物中的表达的调节序列。

3.根据权利要求1或2中任一项所述的重组细菌，其是产溶剂细菌，更特别地是产乙醇细菌。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的重组细菌，其是丙酮丁醇梭菌(Clostridium acetobutylicum)。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的重组细菌，其中所述Cel5H多肽或其同源物，或所述Cel5H多肽或所述同源物的功能片段和/或变体融合至与所述Cel5H多肽或其同源物异源的一个或多个结构域，所述一个或多个结构域选自多纤维素酶体支架蛋白的糖苷水解酶(GH)催化结构域，糖结合组件(CBM)结构域，黏结蛋白结合结构域诸如锚定结构域，和亲水(X组件)结构域。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的重组细菌，其中所述Cel5H多肽或其同源物，或所述Cel5H多肽或所述同源物的功能片段和/或变体，和任选地一种或多种能够降解含纤维素物质的酶，包含在杂交的和/或共价的多纤维素酶体或小型多纤维素酶体中。

7.Saccharophagus degradans 2-40株的Cel5H多肽的分离的结构域(DZ结构域)，即所述Cel5H多肽的氨基酸496至氨基酸596或与其同源的分离的结构域，或所述DZ结构域或所述同源的结构域的功能片段和/或变体。

8.一种Cel5H多肽或其同源物或变体的分离片段，其具有结构EPR-DZ，CBM6-EPR-DZ或PSL-CBM6-EPR-DZ，其中EPR代表富含谷氨酸-脯氨酸的区域，且PSL代表聚丝氨酸接头。

9.一种嵌合多肽，其包含根据权利要求7所述的分离的结构域或其功能片段和/或变体，或Cel5H多肽的根据权利要求8所述的分离片段，且还包含与Cel5H多肽或其同源物异源的一个或多个结构域，所述一个或多个结构域选自多纤维素酶体支架蛋白的GH催化结构域，CBM结构域，黏结蛋白结合结构域诸如锚定结构域，和亲水(X组件)结构域。

10.一种重组核酸，其编码根据权利要求7所述的分离的结构域或其功能片段和/或变体，或Cel5H多肽的根据权利要求8所述的分离片段，或根据权利要求9所述的嵌合多肽。

11.根据权利要求10所述的重组核酸，还包含调节序列，所述调节序列允许在宿主细菌中的表达。

12.一种用根据权利要求10或11所述的重组核酸转化的宿主细菌。

13.根据权利要求12所述的宿主细菌，其为丙酮丁醇梭菌。

14.一种降解包含纤维素的物质的方法，所述方法包括使所述物质与根据权利要求1-6中任一项所述的重组细菌，或与根据权利要求7所述的分离的结构域或其功能片段和/或变体、或Cel5H多肽的根据权利要求8所述的分离片段、或根据权利要求9所述的嵌合多肽、或根据权利要求9所述的嵌合肽、或根据权利要求12或13所述的宿主细菌接触。

15.一种由包含纤维素的物质产生溶剂、燃料或化学中间体的方法，所述方法包括用根据权利要求1-6中任一项所述的重组微生物或用根据权利要求11或12所述的宿主细菌处理所述物质。

16.根据权利要求14或15所述的方法，其中所述物质包含或富含结晶纤维素。