[发明专利]用于乙醇生产的孢子形成缺陷嗜热微生物

权利要求书

1.一种嗜热微生物，包含与野生型相比孢子形成减少的修饰。

2.权利要求1的微生物，其中所述修饰使天然spo0A基因失活。

3.权利要求2的微生物，其中所述修饰包括缺失所述spo0A基因的至少一部分。

4.权利要求3的微生物，其中所述修饰还包括用编码限制性位点的DNA代替所述spo0A基因的缺失部分。

5.权利要求4的微生物，其中所述限制性位点是NotI限制性位点。

6.前述权利要求任一项的微生物，其中所述微生物是地芽孢杆菌属(Geobacillus)种。

7.前述权利要求任一项的微生物，其中所述微生物是热葡糖苷酶地芽孢杆菌(Geobacillus thermoglucosidasius)。

8.前述权利要求任一项的微生物，还包含使天然乳酸脱氢酶基因失活的修饰。

9.权利要求8的微生物，其中所述乳酸脱氢酶基因或其一部分已缺失。

10.权利要求8或9的微生物，其中所述微生物在所述乳酸脱氢酶基因中不包含整合元件。

11.前述权利要求任一项的微生物，还包含使天然丙酮酸甲酸裂解酶基因失活的修饰。

12.权利要求11的微生物，其中所述丙酮酸甲酸裂解酶基因或其一部分已缺失。

13.前述权利要求任一项的微生物，还包含上调所述丙酮酸脱氢酶基因的修饰。

14.权利要求13的微生物，其中将基因启动子插入到所述丙酮酸脱氢酶基因的上游，并且其中所述启动子在厌氧条件下起作用。

15.前述权利要求任一项的微生物，还包含增强丙酮酸脱羧酶活性的修饰。

16.权利要求15的微生物，其中所述修饰使二氢硫辛酰胺转乙酰酶基因(EC 2.3.1.12)失活。

17.权利要求15或16的微生物，其中所述二氢硫氢酰胺转乙酰酶基因或其部分缺失。

18.前述权利要求任一项的微生物，其中所述微生物包含异源丙酮酸脱羧酶基因。

19.前述权利要求任一项的微生物，其中所述微生物包含异源醇脱氢酶基因。

20.前述权利要求任一项的微生物，其中所述微生物在包含至少3％w/v乙醇的培养基中是稳定的。

21.前述权利要求任一项的微生物，其中所述微生物在包含至少10％w/v乙醇的培养基中是稳定的。

22.前述权利要求任一项的微生物，其中所述微生物在包含最高达20％w/v乙醇的培养基中是稳定的。

23.前述权利要求任一项的微生物，其中所述微生物可被高频转化。

24.前述权利要求任一项的微生物，其中所述微生物在40℃-85℃、优选在50℃-70℃的温度下生长。

25.前述权利要求任一项的微生物，其中所述微生物被鉴定为TM443(登记号41591)或TM444(登记号41588)。

26.前述权利要求任一项的微生物，其中所述微生物包含受控于在厌氧条件下起作用的启动子的异源淀粉酶基因。

27.权利要求26的微生物，其中所述启动子是ldh启动子。

28.权利要求27的微生物，其中所述ldh启动子是异源的。

29.权利要求28的微生物，其中所述ldh启动子来自嗜热脂肪地芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)。

30.权利要求26的微生物，其中所述淀粉酶基因受控于一系列强启动子。

31.权利要求30的微生物，其中所述强启动子是异源的。

32.权利要求31的微生物，其中所述强启动子包括淀粉酶启动子。

33.权利要求31或32的微生物，其中所述启动子来自嗜热脂肪地芽孢杆菌。