[发明专利]小型振荡瓶培养

权利要求书

1.培养哺乳动物细胞的方法，包括根据i)培养基中的活细胞密度改变培养容器的机械运动速度的步骤。

2.根据权利要求1的方法，其特征在于所述改变进一步取决于ii)培养基中的氧分压。

3.根据权利要求1或2任一项的方法，进一步包括一个或多个如下步骤：

a)培养一套培养容器

-每一个容器的总容积最高为200μl，或

-每一个容器的工作容积最高为100μl，或

-每一个容器的总容积在25ml至3000ml之间，或

-每一个容器的工作容积在10ml至1500ml之间，

b)通过整个培养容器的机械运动来搅动培养基，

c)通过培养容器的外气相的二氧化碳浓度来调节培养基的pH值。

4.根据前述任一项权利要求的方法，其特征在于通过整个培养容器的旋转运动或整个培养容器的俯仰运动或整个培养容器的振荡进行机械运动。

5.根据前述任一项权利要求的方法，进一步包括：

d)通过非侵入性光化学传感器确定培养容器内的pH值和pO₂。

6.根据前述任一项权利要求的方法，其特征在于机械运动速度的调节如下：

i)根据起始细胞密度将机械运动速度设置为60rpm至100rpm，其中

当细胞密度为1x10⁵细胞/ml或更小时设置为60rpm，

当细胞密度为2.5x10⁵细胞/ml时设置为80rpm，

当细胞密度为5x10⁵细胞/ml时设置为100rpm，

或在中间细胞密度时设置为线性中间值，

ii)活细胞密度每增加一倍，机械运动速度增加20rpm，直至细胞浓度达到20x10⁵细胞/ml，

iii)活细胞密度每增加20x10⁵细胞/ml，机械运动速度增加20rpm，直至细胞密度达到80x10⁵细胞/ml，

iv)活细胞密度由80x10⁵细胞/ml增加至细胞密度100x10⁵细胞/ml时，机械运动速度增加10rpm。

7.根据权利要求6的方法，其特征在于机械运动的速度进一步调节如下：

v)维持机械运动速度在200rpm至210rpm之间，逐步降低机械运动速度至135rpm，并保持该速度不变直到培养完成。

8.根据权利要求7的方法，其特征在于步骤v)中机械运动的速度维持在200rpm至210rpm达18小时至30小时。

9.根据前述任一项权利要求的方法，进一步包括，

e)增加机械运动速度来增加培养基中的氧分压或降低机械运动速度来降低培养基中的氧分压。

10.生产异源多肽的方法，包括以下步骤：

a)提供含有编码所述异源多肽的核酸的哺乳动物细胞，

b)用根据权利要求1-9任一项的方法培养所述哺乳动物细胞，

c)从培养基中回收异源多肽。

11.根据权利要求10的方法，其特征在于异源多肽是免疫球蛋白或免疫球蛋白片段或免疫球蛋白接合物。

12.根据权利要求10或11任一项的方法，其特征在于哺乳动物细胞是CHO细胞、HEK细胞、BHK细胞、NS0细胞、SP2/0细胞或杂交瘤细胞。

13.非侵入性光化学传感器在权利要求1-9任一项的方法中用于测定小型培养容器中的pH值和pO₂的应用。

14.根据权利要求1-9任一项的方法用于确定在容积为1000l至25000l的搅拌培养容器中的大型培养的培养参数范围的应用。