[发明专利]基于ADP检测的发光磷酸转移酶或ATP水解酶测定

权利要求书

1.用于检测溶液中腺苷二磷酸(ADP)的存在与否或测定其含量的方法，所述方法包括：

(a)使用将ATP转化为非ADP产物的酶，基本上将溶液中的所有ATP减少成非ADP产物；

(b)使用能够将ADP转化为ATP和磷酸基团供体的酶，将溶液中的ADP转化为ATP；和

(c)采用生物发光反应，检测(a)中所产生的ATP的存在与否或测定其含量。

2.权利要求1的方法，所述方法还包括：

(d)在(b)或(c)之前，基本上除去(a)中产生的所有焦磷酸(PPi)。

3.权利要求1或2的方法，所述方法还包括：

(e)在(b)或(c)之前，抑制将ATP转化为非ADP产物的酶。

4.权利要求1-3中任一项的方法，其中通过产生ADP的酶在溶液中产生ADP，而且所述生物发光反应提供对产生ADP的酶的度量。

5.权利要求4的方法，其中所述产生ADP的酶是将ATP转化为ADP的酶。

6.权利要求5的方法，其中所述将ATP转化为ADP的酶是激酶或ATP水解酶。

7.权利要求6的方法，所述方法还包括：

(f)在(a)之前，在激酶反应或ATP水解酶反应的已知或推定抑制剂的存在或不存在下，进行所述激酶反应或ATP水解酶反应。

8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述将ATP转化为非ADP产物的酶是腺苷酸环化酶。

9.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述能够将ADP转化为ATP的酶是丙酮酸激酶。

10.权利要求1-9中任一项的方法，其中所述生物发光反应包含萤光素酶和所述萤光素酶的底物。

11.权利要求2-10中任一项的方法，其中(d)用焦磷酸酶来进行。

12.用于检测溶液中的ADP的试剂盒，所述试剂盒包含：

(i)将ATP转化为非ADP产物的酶；

(ii)能够将ADP转化为ATP的酶；

(iii)磷酸基团供体；

(iv)萤光素酶；和

(v)所述萤光素酶的底物。

13.权利要求12的试剂盒，所述试剂盒还包含一种或多种以下成分：(vi)焦磷酸酶；

(vii)一种或多种去垢剂；

(viii)一种或多种缓冲液；和/或

(ix)一种或多种盐。

14.权利要求12或13的试剂盒，其中所述将ATP转化为非ADP产物的酶是腺苷酸环化酶，所述能够将ADP转化为ATP的酶是丙酮酸激酶和/或所述磷酸基团供体是磷酸烯醇式丙酮酸。