[发明专利]生产乳酸的细菌及生产乳酸的方法有效
| 申请号： | 200980136176.7 | 申请日： | 2009-09-11 |
| 公开（公告）号： | CN102159702A | 公开（公告）日： | 2011-08-17 |
| 发明（设计）人： | 和田光史;高桥克幸;森重敬;宫泽大辅;高桥均;望月大资;安乐城正 | 申请（专利权）人： | 三井化学株式会社 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/09;C12P7/56 |
| 代理公司： | 北京市金杜律师事务所 11256 | 代理人： | 杨宏军 |
| 地址： | 日本*** | 国省代码： | 日本;JP |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 生产 乳酸 细菌 方法 | ||
1.一种生产乳酸的大肠杆菌，所述大肠杆菌的1种以上的NAD依赖性乳酸脱氢酶及1种以上的非NAD依赖性乳酸氧化还原酶的各酶活性均被增强，从而分解D-乳酸及L-乳酸中的任一方而生产另一方。
2.如权利要求1所述的生产乳酸的大肠杆菌，其中，所述NAD依赖性乳酸脱氢酶的活性增强使丙酮酸生成D-乳酸和L-乳酸中的任一方，并且，所述非NAD依赖性乳酸氧化还原酶的活性增强使所述D-乳酸及L-乳酸中的任意另一方作为基质进行分解。
3.如权利要求2所述的生产乳酸的大肠杆菌，其中，所述NAD依赖性乳酸脱氢酶的活性增强是LdhA的活性增强，能够生产所述D-乳酸。
4.如权利要求3所述的生产乳酸的大肠杆菌，其中，所述非NAD依赖性乳酸氧化还原酶的活性增强是LldD的活性增强、L-乳酸氧化酶的活性增强、LldR的失活或活性降低、或它们中的一种以上的组合，能够生产所述D-乳酸。
5.如权利要求4所述的生产乳酸的大肠杆菌，其中，所述L-乳酸氧化酶是Lox及LctO中的至少一方。
6.如权利要求4所述的生产乳酸的大肠杆菌，其中，所述非NAD依赖性乳酸氧化还原酶的活性增强是通过在编码LldD的基因的ORF中的33位上具有沉默突变的突变体lldD基因产生的。
7.如权利要求6所述的生产乳酸的大肠杆菌，其中，所述突变体LldD是以序列号41的碱基序列表示的。
8.如权利要求3所述的生产乳酸的大肠杆菌，其中，选自由Dld活性及Pfl活性组成的组中的至少一种活性失活或活性降低。
9.如权利要求2所述的生产乳酸的大肠杆菌，其中，所述NAD依赖性乳酸脱氢酶的活性增强是NAD依赖性L-乳酸脱氢酶活性的增强，能够生产所述L-乳酸。
10.如权利要求9所述的生产乳酸的大肠杆菌，其中，所述非NAD依赖性乳酸氧化还原酶活性增强是Dld的活性增强，能够生产所述L-乳酸。
11.如权利要求9所述的生产乳酸的大肠杆菌，其中所述L-乳酸脱氢酶来自双歧杆菌属菌。
12.如权利要求10所述的生产乳酸的大肠杆菌，其中，所述Dld具有Lact deh memb结构域。
13.如权利要求10所述的生产乳酸的大肠杆菌，其中，所述Dld来自选自由大肠杆菌、发酵单胞菌及棒状菌组成的组中的至少一种。
14.如权利要求9所述的生产乳酸的大肠杆菌，其中，LdhA活性、LldD活性及Pfl活性中的至少一种失活或活性降低。
15.如权利要求1所述的生产乳酸的大肠杆菌，其中，选自由Mdh及AspA活性组成的组中的至少一种活性失活或活性降低。
16.如权利要求1所述的生产乳酸的大肠杆菌，其中，选自由蔗糖非PTS基因组及FruK组成的组中的至少一种被增强。
17.如权利要求1所述的生产乳酸的大肠杆菌，其中，FruR活性失活或降低。
18.一种生产乳酸的方法，使用权利要求1所述的生产乳酸的大肠杆菌生产乳酸。
19.一种生产D-乳酸的方法，使用权利要求3所述的生产乳酸的大肠杆菌生产D-乳酸。
20.一种生产L-乳酸的方法，使用权利要求9所述的生产乳酸的大肠杆菌生产L-乳酸。
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