[发明专利]对甲型流感病毒H1亚型具有同亚型交叉中和性能的单克隆抗体

说明书

总的来说，本发明涉及免疫学领域。

更具体地说，本发明涉及针对甲型流感病毒(influenza virus A)H1亚型HA(血凝素)抗原的单克隆抗体，其对来自人的分离株和来自动物的分离株两者都能够识别并中和。

流感病毒能感染不同物种的动物，其中特别是若干鸟类、猪科和马科的物种。这些病毒中只有少数已经成功地适应人类，即感染人类，特别是其自身可以从人到人进行传播。允许这种适应性的主要因素与该病毒最重要的表面蛋白(血凝素)的特性相关联。尤其是，依据这种蛋白的抗原特性已鉴别出16个亚型(H1-H16)，只有其中三个(H1、H2和H3)已成功地完全适应人类，是造成过去一个世纪三次流感大流行的原因。目前在人类中流通并导致季节性流感流行的有两种亚型-H1亚型和H3亚型。H1亚型(本发明的抗体所识别的目标)出现于1918年，导致了被命名为“西班牙流感”(根据报导第一个病例的欧洲国家而命名)的可怕大流行。最近的研究表明，负责“西班牙流感”的这种病毒是感染鸟类的禽流感病毒，作为少数突变的结果，该病毒发展出了能够感染人并且其自身可以从人到人进行传播的能力。1918年的分离株是在人类与其他动物(如猪)中发现的所有H1亚型病毒的共同祖先。直至1957年，每年度人类流感的流行都是由H1亚型病毒引起的，在该年，它们被具H2亚型血凝素的病毒所取代，后者造成了所谓的“亚洲”大流行。直到1977年，再也没有由H1亚型引起的病例报告，在该年，由于仍然不完全明白的原因，在俄罗斯重新出现了少量的H1分离株。因此，现在，H1亚型病毒仍在流通，并与自1967年以来在人类出现的H3亚型病毒发生关联。例如，欧洲2007-08流感季节(包括从2007年第40周至2008年第16周期间)的通告证明，30％的有效分离株与H1亚型血凝素相关(European Influenza Surveillance Scheme-Weekly Electronic Bulletin-April 28，2008)。

每年的流感病毒流行对公共健康服务和与此相关的费用造成相当大的影响。仅在美利坚合众国，据估计，每年有超过200,000人因流感病毒的症状住院，有约40,000人的死亡或多或少与此直接相关(Thompson等，JAMA，2003，289：179-186)。我们必须以指数更大的数字向这些数据添加在或长或短时期不能去工作的感染者的所有病例，以及因工作日减少而导致的不可避免的经济损失。最近的一项工作(Molinari等，Vaccine，2007，25：5086-5096)估计，与每年流感流行直接相关的医疗费用为每年10.4亿美元，对此，还必须加入另外的16.3亿美元，这是由于缺勤而导致的收入损失。如果在计算中我们再考虑其他项目，如将与感染者的死亡相联系的经济损失货币化，数量会上升到每年871亿美元的惊人数字。

目前，面对年度流感流行，在某种程度来说唯一可用的工具是含H1亚型和H3亚型病毒分离株抗原(还有乙型分离株)的灭活三价疫苗，它们可能就成为引起下一个流感季节的流行病因。基于与一些标志地理区域的早期分离相联系的流行病学数据的这种类型的预测并不总是成为正确。因此，存在不是微不足道的风险，这种风险一年又一年存在，即为某一流感季节研制的三价疫苗相反地可能是实质上无效的。

在那种情况下，以及在新的大流行的情况下，唯一可用的预防/治疗手段是求助于两类可用的抗病毒药物：M2蛋白抑制剂(金刚烷胺和金刚乙胺)和神经氨酸酶抑制剂(奥赛米韦和扎那米韦)。但是，在这种情况下也一样，已经可以预期一系列的问题，既涉及到需要在感染的非常早期就给予抗病毒药物，同时涉及到抗药性病毒分离株的迅速呈现(这种情况已经发生)。

另一种有效的策略可以是依赖中和抗体制剂，它们直接针对关键的病毒蛋白质并能够识别此类蛋白质在不同的流感病毒分离株中共亭的部分。

为了更好地理解基于被动给予抗体的方案的潜能，有必要简单地提及流感病毒的主要结构特征。流感病毒属于正粘病毒科(Orthomyxoviridae)，其特征是具有源自受感染细胞细胞膜的包膜，在包膜上有约500个突起。这些突起由来自两种重要的病毒表面蛋白即上述的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的三聚体和四聚体组成，其也被用作甲型流感病毒的分型。在包膜表面还发现了膜内在蛋白(M2)，与血凝素和神经氨酸酶相比，该蛋白的数量低得多，也以四聚体构成。