[发明专利]包含具有重氮甲基官能团取代基的吡啶环的标记试剂、用于合成所述试剂的方法以及用于检测生物分子的方法

权利要求书

1.式(C)的标记试剂：

其中：

·R₁表示可检测标记物或通过至少一个多聚体结构连接在一起的至少两个可检测标记物，

·R₂和R₃彼此独立地表示：H、NO₂、Cl、Br、F、I、OR、SR、NR²、R、NHCOR、CONHR、COOR，其中R＝烷基或芳基，并且，

·L是连接臂，其包含具有至少两个共价键的直链。

2.式(D)的标记试剂：

其中：

·R₁表示可检测标记物或通过至少一个多聚体结构连接在一起的至少两个可检测标记物，

·R₂表示：H、NO₂、Cl、Br、F、I、OR、SR、NR²、R、NHCOR、CONHR、COOR，其中R＝烷基或芳基，

·R₄表示：H、烷基或芳基，并且

·L是连接臂，其包含具有至少两个共价键的直链。

3.权利要求1的标记试剂，其具有式(E)：

其中：

·R₂和R₃彼此独立地表示：H、NO₂、Cl、Br、F、I、OR、SR、NR²、R、NHCOR、CONHR、COOR，其中R＝烷基或芳基，并且

·n是1-12的整数，优选1-6的整数。

4.权利要求2的标记试剂，其具有式(F)：

其中：

·R₂表示：H、NO₂、Cl、Br、F、I、OR、SR、NR²、R、NHCOR、CONHR、COOR，其中R＝烷基或芳基，

·R₄表示：H、烷基或芳基，

·-Y-X表示-CH₂NH-、-CONH-、-NHCO-、-CH₂O-或-CH₂S-，并且

·m、n和p彼此独立地各自是1-12的整数，优选1-6的整数。

5.权利要求1和3中任一项的标记试剂，其具有式(G)：

6.权利要求2和4中任一项的标记试剂，其具有式(H)：

7.权利要求1-2中任一项的试剂，其特征在于R₁由式(I)的D-生物素残基构成：

8.用于合成权利要求1、3和5中任一项的标记试剂的方法，其包括以下步骤：

a)使芳族羧酸衍生物与内酯的烯醇化物进行反应(Claisen型反应)以形成环状前体，

b)然后用卤代酸使所述环状前体开环以形成芳族卤代酮，

c)通过保护基保护所述芳族卤代酮的羰基官能团以形成受保护的前体，

d)使所述受保护的前体进行胺化反应(Gabriel型)以形成胺化了的前体，

e)将所述胺化了的前体脱保护以释放胺官能团，使所述胺官能团与其羧基官能团被活化的可检测标记物反应以形成包含可检测标记物的前体，

f)使经标记的前体进行所述羰基官能团的脱保护反应以形成经标记的且包含羰基的前体，并且最终

g)通过将所述羰基官能团转化为重氮官能团，将所述经标记的且包含羰基的前体转化为如上所述的标记试剂。