[发明专利]真核细胞的长期培养方法及其应用

权利要求书

1.一种永生化蛋白复合体，包括：

至少一种内化分子；

至少一种转化多肽；

至少一种核内体释放分子；并且

其中所述至少一种分子或多肽被有效连接到至少一种所述分子或多肽上。

2.如权利要求1所述的永生化蛋白复合体，进一步包括至少一种核内化分子以及至少一种端粒延长分子。

3.如权利要求1或2任一项所述的永生化蛋白复合体，其中：

所述转化多肽能够克服细胞衰老；和/或

所述核内体释放分子可增进所述转化多肽从核内体中释放；和/或

所述内化分子可促进将所述永生化蛋白复合体转移入靶细胞中。

4.如权利要求1或2任一项所述的永生化蛋白复合体，其中所述内化分子是核内体介导。

5.如权利要求4所述的永生化蛋白复合体，其中所述内化分子是受体介导。

6.如权利要求5所述的永生化蛋白复合体，其中所述内化分子包括细胞表面受体结合分子，细胞表面内化分子和/或病毒结合受体分子。

7.如权利要求6所述的永生化蛋白复合体，其中所述内化分子包括EGF受体识别分子或配体，IGF受体识别分子或配体，VEGF受体识别分子或配体，FGF受体识别分子或配体，PDGF受体识别分子或配体，胰岛素受体识别分子或配体，生长激素受体识别分子或配体，肝细胞生长因子受体识别分子或配体，趋化因子受体识别分子或配体，促红细胞生成素受体识别分子或配体，细胞因子受体识别分子或配体，c-kit多肽，HSV病毒蛋白VP22和/或脂质体。

8.如权利要求1或2任一项所述的永生化蛋白复合体，其中所述转化多肽包括一个或多个致癌基因表达产物和/或一个或多个人类端粒酶反转录酶(hTERT)。

9.如权利要求8所述的永生化蛋白复合体，其中所述致癌基因表达产物包括：

病毒致癌基因表达产物，包括一个或多个HPV E6，HPV E7，SV40T抗原，腺病毒E1a，腺病毒E1B，EB病毒，EBNA2蛋白以及LMP-1蛋白；和/或

细胞致癌基因表达产物，包括一个或多个ras，myc以及src致癌基因表达产物。

10.如权利要求1或2任一项所述的永生化蛋白复合体，其中所述核内体释放分子包括核内体释放信号多肽。

11.如权利要求10所述的永生化蛋白复合体，其中所述核内体释放分子包括病毒或合成核内体释放分子。

12.如权利要求1或2任一项所述的永生化蛋白复合体，其中所述核内化分子包括核受体结合分子和/或核受体分子。

13.如权利要求12所述的永生化蛋白复合体，其中所述核内化分子进一步包括类固醇，脂溶性分子，视黄酸，维生素D，类固醇受体超家族成员，视黄酸受体家族成员和维生素D受体或其结合物。

14.如权利要求1或2任一项所述的永生化蛋白复合体，其中所述端粒延长分子包括hTERT。

15.如权利要求14所述的永生化蛋白复合体，其中所述端粒延长分子进一步包括端粒酶催化亚单位hTERT，或hTR，hTP-A，人源或其它哺乳动物同源染色体TERT。

16.一种用于永生化细胞的方法，包括：

将权利要求1或2任一项所述的永生化蛋白复合体与靶细胞在一定条件下接触，经过一段有效时间，所述永生化蛋白复合体被内化，所述转化多肽被释放；并且

允许所述转化多肽延长细胞存活期和/或克服细胞停滞，和/或克服细胞衰老和/或阻止细胞分化。

17.如权利要求16所述的方法，进一步包括将所述永生化蛋白复合体从细胞培养基中移除，以逆转永生化效果，获得具有正常表型及能够经历完全分化的细胞。

18.如权利要求16所述的方法，其中所述靶细胞包括角质细胞，肝细胞，胰岛细胞，心肌细胞，骨细胞，内皮细胞，平滑肌细胞，神经细胞和星状细胞。

19.如权利要求16所述的方法，其中所述永生化蛋白复合体以脂质体形式与所述靶细胞接触。