[发明专利]凝血时间延长原因的判定方法

说明书

技术领域

本发明涉及用于判定血液试样中的凝血时间延长原因的方法。

背景技术

凝血试验是测定从向样本或样本混合物中添加活化剂和/或Ca²⁺等的时刻开始到形成可检测的纤维蛋白块时的时间(凝血时间、以下有时也仅称凝固时间)，其是用于筛选凝血反应系统有无异常或测定个别因子的活性而实施的。作为典型例，有凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间等。

PT是指向被测血浆中添加组织凝血活酶和Ca²⁺的混合液后到凝固时的时间，用于对与外源性凝血机制有关的第VII因子、第X因子、第V因子、凝血酶原、纤维蛋白原等的凝血活性进行综合性检查。另外，APTT是指向被测血浆中添加足够量的磷脂和活化剂(高岭土、无水硅酸、鞣花酸等)及适量的Ca²⁺后到凝固时的时间，用于对与内源性凝血机制有关的第XII因子、第XI因子、激肽释放酶原、高分子激肽原、第IX因子、第VIII因子、第X因子、第V因子、凝血酶原、纤维蛋白原等的凝血活性进行综合性检查。一般来说，这些凝血试验的异常是指凝血时间延长。凝血反应系统的异常反映出体内的出血倾向或血栓形成倾向(凝血倾向)的征兆。

作为其原因，考虑有如下几个：1)凝血因子的缺乏或减少、2)存在针对构成凝血系统的血液成分的抗体、3)存在针对凝血时间测定试剂中的成分的抗体、4)存在针对构成凝血系统的血液成分和凝血时间测定试剂中的成分的复合物的抗体、5)施用了抑制凝血反应的药剂等。

但是，仅凭进行凝血时间的测定不能鉴别其原因是由于单纯的凝固因子缺乏导致的活性降低，还是由于针对构成凝血系统的成分或凝血时间测定试剂中的成分等的抗体(抑制物)抑制了凝血反应而导致的活性降低。另外，由于治疗方案根据该原因的不同而异，因此该鉴别是很重要的。因此，进行向被测血浆中添加正常血浆，对其凝血时间校正的(正常化的)程度作图来进行判定的凝血校正试验(混合试验)(非专利文献1)。

以往，混合试验例如如下实施。

准备通过向被测血浆添加正常血浆并混合使正常血浆的比例为0、20、50、80、100％而制备的样品，进行APTT的测定。将其结果标绘制图(横轴：混和的正常血浆的比例或被测血浆的比例(％)、纵轴：凝固时间(秒))，根据该曲线图的形状目测进行判定。例如，凝固因子缺乏的情况下，添加少量的正常血浆(图1(A)中为20％)时凝固时间即显著缩短而接近正常血浆时的值，因此显示为与被测血浆和正常血浆的点连接而成的直线(虚线)相比向下凸出的曲线(图1(A))。

存在凝固因子抑制物的情况下，即使提高正常血浆的添加比例，正常血浆中的该凝固因子也会失活，因此添加正常血浆所引起的凝固时间的改善程度小，显示为向上凸起的曲线(图1(B))。

但是，根据样本的不同有时会呈现与虚线相同形状的曲线图(图1(C))，此时存在非常难以进行判定的问题。

另外，混合试验是通过目测进行判定，并非将校正的程度定量化的统一的方法，最终的判定取决于判定者，因此，判定结果因判定者的熟练程度而异的可能性也是个问题。

另外，还存在判定结果随测定的试剂对凝固因子抑制物的敏感性的差异而改变的可能性。作为特别依赖于试剂的敏感性的凝固因子抑制物，已知有狼疮抗凝物(以下称为LA)。LA并非对各个凝固因子的抑制物，而是抑制磷脂依赖性凝血反应的免疫球蛋白。由于凝血反应中必须存在磷脂，因此，通常很多凝血测定试剂中含有丰富的磷脂。LA与试剂中的磷脂反应而将其消耗，结果抑制凝血反应，因此，PT、APTT之类的凝血检查多发现变为异常。但是，已知LA的反应强度因磷脂的种类(来源、磷脂组成等)而异，因此判定结果会因所使用的试剂而异。

为了不受判定者熟练程度的影响而容易地进行判定，还已知如下的判定方法(非专利文献2)：设被测血浆的凝固时间为a、被测血浆与正常血浆的5∶5的混合物的凝固时间为b、正常血浆的凝固时间为c，

1)(a+c)/2≤b、2)(b-c)/a≥x、3)b-c≥x、4)b/c≥x。

上述判定方法1)只是将曲线上凸或是下凸进行数值化，目测判定和结果并没有改变。判定方法2)也称为罗斯纳指数(Rosner Index)，被认为是对于判定LA特别有用的判定方法，x为0.15是适当的，而该值是通过白陶土凝固时间(KCT)设定的值。实际上，对于各设备中使用的试剂需要设定适当的x值，但该设定方法不明确(非专利文献3)。判定方法3)～4)也需要在各设备中进行x的设定，但该设定方法不明确，作为判定方法不能说是充分的。