[发明专利]在皮肤伤口愈合中使用干细胞的组合物和方法

说明书

相关申请

本申请要求于2008年3月27日提交的美国临时专利申请序列号61/039,941的优先权的权益，该申请的全部内容通过引用方式并入本文。

发明领域

本申请与制备和使用干细胞用于伤口愈合应用的组合物和方法相关。

背景

慢性伤口仍是难以应对的挑战。尽管近期重组生长因子和生物工程化皮肤方面取得一定突破，但还有高达50％的慢性伤口用一年多的时间仍保持对治疗的抗性。

纤维蛋白封闭剂是一种外科手术式“胶水”，由人体的凝血蛋白制成，通常用于在手术过程中控制出血。纤维蛋白封闭剂已被用于增强止血效果、封合组织、协助靶向给药，以及伤口治疗。见如，美国专利公开号2008/0181879、2008/0199513、2004/0229333和2006/0240555，以上文献以引用方式并入本文。虽然，过去几年，我们在治疗难愈性伤口方面已取得一定进步，但先进的治疗手段对于相当一部分(高达50％)慢性伤口，特别是持续超过一年的伤口，仍不起作用。因此，仍需刺激急性和慢性伤口的愈合，达到标准护理措施或最近研发创新方法目前不能达到的水平。

概要

本发明提供了使用纤维蛋白封闭剂及其给药系统的组合物和方法，其中纤维蛋白封闭剂包括干/祖细胞。根据某些实施方式，本发明提供了在伤口患处局部施用纤维蛋白封闭剂的方法，其中，纤维蛋白封闭剂由纤维蛋白原复合体成分、凝血酶成分及细胞成分的混合物制成。根据某些实施方式，细胞成分包含一种或更多种的干/祖细胞(如间充质干细胞或外周血干细胞)和/或遗传修饰干细胞。根据某些实施方式，细胞成分可能包含干/祖细胞的混合物。根据优选实施方式，纤维蛋白封闭剂包含至少1.5-2.0 X 10⁶个干/祖细胞/每平方厘米。

根据某些实施方式，纤维蛋白封闭剂通过将纤维蛋白原复合体(FC)成分、凝血酶成分和细胞成分混合制成。FC/凝血酶的比率介于每25单位/毫升凝血酶2至10毫克/毫升纤维蛋白原之间。FC/凝血酶的比率优选为约每25单位/毫升凝血酶约5毫克/毫升纤维蛋白原。

根据某些实施方式，纤维蛋白封闭剂通过将纤维蛋白原复合体(FC)成分和凝血酶成分混合制成。在另一实施方式中，可在混合FC成分与凝血酶成分前，向FC成分中添加细胞成分。根据某些实施方式，可向凝血酶成分中添加细胞成分。根据某些实施方式，可在允许成分形成纤维蛋白凝胶前，向FC与凝血酶的混合物中添加细胞成分。

根据优选实施方式，蛋白酶抑制剂被排除在本发明的纤维蛋白封闭剂组合物之外。

本发明还提供了多种方法，用于浸渍或接种纤维蛋白封闭剂，以形成用于治疗急慢性伤口的治疗制剂。这些方法包括为患者施用含有细胞成分的纤维蛋白封闭剂。根据某些实施方式，纤维蛋白封闭剂为聚合凝胶或喷雾剂形态。在伤口愈合过程中，可按需要在伤口患处施用本发明的纤维蛋白封闭剂一次、两次、三次、四次、五次或以上等等。

根据某些实施方式，本发明提供了治疗急慢性伤口的方法。一般而言，患者的伤口都可受益于本文所述组合物和方法，这对于该领域的普通技术人员是清楚的。根据优选实施方式，伤口是一种慢性皮肤伤口。

在某实施方式中，我们按该领域的公知方法为患者施用纤维蛋白封闭剂，如注射、喷涂、内窥镜施用或预制凝胶，以及该领域普通技术人员熟知的其它方法。

根据优选实施方式，本发明提供了一种纤维蛋白封闭剂，该纤维蛋白封闭剂含有纤维蛋白原复合体(FC)成分、凝血酶成分和细胞成分，其中，用于形成凝胶的纤维蛋白原浓度介于约2至约5毫克/毫升之间，细胞成分中含有一种或更多种干/祖细胞，纤维蛋白封闭剂中含有至少1.5-2.0 X 10⁶个干/祖细胞/每平方厘米。

根据优选实施方式，本发明提供了一种使用纤维蛋白封闭剂的方法，包括：a)将干/祖细胞与纤维蛋白封闭剂组合，来形成伤口封闭剂，该纤维蛋白封闭剂含有钙凝血酶和纤维蛋白原，其中，钙凝血酶的浓度约为25单位/毫升，纤维蛋白原的浓度约为2至5毫克/毫升，干/祖细胞的最终浓度至少约为1.5至2.0 X 10⁶个干/祖细胞/平方厘米；b)将纤维蛋白封闭剂施用到皮肤伤口上，其中，所施用的纤维蛋白封闭剂为聚合凝胶或喷雾剂的形态。