[发明专利]利用甘露糖基转移酶抑制剂有效生产异源蛋白质

权利要求书

1.选自以下组的化合物或其盐：

2.生产具有降低的O-联糖基化的蛋白质的方法，包括：

(a)使细胞在产生所述蛋白质的培养物中生长；

(b)使所述培养物与权利要求1的一种或多种化合物接触，所述化合物抑制Pmt介导的O-联糖基化；和

(c)分离所述宿主细胞产生的所述蛋白质。

3.权利要求2的方法，其中通过以下步骤得到所述细胞的培养物：

(a)提供编码蛋白质的核酸；和

(b)将所述核酸导入所述细胞。

4.权利要求3的方法，其中所述培养物生长足够的时间以提供大量的具有所述核酸的所述细胞，然后使所述培养物与抑制Pmt介导的O-联糖基化的任何所述一种或多种化合物接触。

5.权利要求3的方法，其中所述培养物在存在抑制Pmt介导的O-联糖基化的任何所述一种或多种化合物的条件下生长。

6.权利要求3的方法，其中所述核酸与诱导型启动子可操作地连接。

7.权利要求6的方法，其中所述培养物生长足够的时间以提供大量的具有所述核酸的所述细胞，然后使所述培养物与抑制Pmt介导的O-联糖基化的所述一种或多种化合物以及诱导所述蛋白质表达的所述启动子的诱导物接触，并分离在存在所述一种或多种抑制剂和所述诱导物的条件下所述细胞产生的蛋白质来生产具有降低的O-联糖基化的蛋白质。

8.权利要求6的方法，其中使所述培养物与所述启动子的诱导物接触以诱导所述蛋白质表达一定时间，然后使所述培养物与抑制Pmt介导的O-联糖基化的所述一种或多种化合物接触，并分离在存在抑制Pmt介导的O-联糖基化的所述一种或多种化合物和所述诱导物的条件下由所述细胞产生的蛋白质来生产具有降低的O-联糖基化的蛋白质。

9.权利要求3的方法，其中所述细胞是真菌细胞。

10.权利要求3的方法，其中所述细胞是酵母细胞。

11.权利要求3的方法，其中所述细胞选自乳酸克鲁维酵母、巴斯德毕赤氏酵母、甲醇毕赤氏酵母和汉逊氏酵母。

12.权利要求3的方法，其中所述细胞是巴斯德毕赤氏酵母。

13.权利要求3的方法，其中所述细胞是酵母或丝状真菌细胞，它们已经被基因修饰以产生N-聚糖糖形占优势的糖蛋白。

14.权利要求3的方法，其中所述细胞已经被基因修饰以产生下述糖蛋白，在该糖蛋白中N-糖基化模式是人样的或人源化的。

15.权利要求3的方法，其中以至少100mg/升培养基的产量产生所述蛋白质。