[发明专利]热休克蛋白GP96的疫苗接种及其使用方法

说明书

相关申请

本申请要求享有2008年3月20日提交的美国临时申请系列第61/038,313号的优先权权益，该临时申请的全部内容通过引用并入本文。

政府支持

本发明是受美国政府支持在由国立卫生研究院授予的和来自ACGT的基金号CA109094、CA039201之下作出的。美国政府可以拥有本发明的某些权利。

发明领域

本发明涉及医学、免疫学和肿瘤学领域。更具体而言，本发明涉及用于诱导动物受治疗者中针对肿瘤的免疫应答的方法和组合物。

背景

抗肿瘤疫苗接种当施用至首次用于实验的无肿瘤小鼠时是相当有效的，在随后的攻击之后产生免于肿瘤生长的保护。保护总体上是持久的且是肿瘤特异性的，表明适应性免疫应答的参与。当疫苗用于已形成的肿瘤的治疗性处理时，这种景象从根本上改变。能够有效建立保护性免疫的相同剂量的疫苗一般不能提供治疗益处。这种缺乏治疗性疫苗接种的疗效的原因被认为是由肿瘤诱导的抑制性细胞的诱导、调节性细胞的产生、T细胞无反应性或耐受的诱导、或这些机制的组合引起的。无论肿瘤引导的免疫抑制的确切机制是什么，用于癌症治疗的疫苗疗法的成功将取决于战胜或中和这些肿瘤引导的抑制作用。

位于内质网(ER)的热休克蛋白(hsp)gp96被认为用作在到达MHCI类分子和II类分子途中的肽的蛋白伴侣。gp96陪伴的肽包括全部范围的在细胞中产生并运输到ER中的肽和较大蛋白片段。从肿瘤细胞获得并用作疫苗的gp96大概通过运输肿瘤特异性肽至APC来诱导特异性肿瘤免疫。参见J Immunol.1999 Nov 15；163(10)：5178-82。

本申请中描述的发明提供了抗肿瘤组合物。热休克蛋白糖蛋白(gp)96相关肽被树突细胞交叉递呈至CD8细胞。研发了适于抗肿瘤治疗的疫苗接种系统。参见J Immunother.2008 May；31(4)：394-401和其中引用的参考文献。将gp96-免疫球蛋白(Ig)G1-Fc融合蛋白转染到肿瘤细胞中导致与陪伴的肿瘤肽相复合的gp96-Ig的分泌。分泌gp96-Ig的肿瘤的胃肠外施用引发与先天免疫系统激活相联合的强健的抗原特异性CD8细胞毒性T淋巴细胞扩增。分泌gp96的肿瘤引起树突细胞(DC)和自然杀伤(NK)细胞向分泌gp96的部位募集并通过结合CD91和Toll样受体-2和Toll样受体-4介导DC的激活。gp96及其陪伴的肽的胞吞摄取引发肽通过主要组织相容性复合体(MHC)I类的交叉递呈以及不依赖CD4细胞的强的同源CD8的激活。在该模型系统中，通过使用过继转移的、T细胞受体(TCR)转基因的、绿色荧光蛋白(GFP)标记的CD8T细胞可以在疫苗接种4至5天内对CD8 CTL扩增进行精确定量。

概述

本发明提供了被基因修饰以表达编码分泌形式的热休克蛋白(hsp)gp96多肽的核酸的肿瘤细胞。本发明还提供了通过施用被基因修饰以表达编码分泌形式的gp96多肽的核酸的肿瘤细胞来刺激对包括癌症肿瘤在内的肿瘤的免疫应答的方法。优选地，所述免疫应答是保护性免疫应答。优选地，所述肿瘤细胞是异基因肿瘤细胞。本发明另外提供了通过施用被基因修饰以表达分泌形式的gp96多肽的肿瘤细胞如癌症肿瘤细胞来抑制包括癌症在内的肿瘤的方法。优选地，所述肿瘤细胞是异基因肿瘤细胞。本发明另外提供制造针对癌症的疫苗的方法，该方法包括基因修饰癌细胞群以表达编码核酸的肿瘤细胞，所述肿瘤细胞用包含编码分泌形式的热休克蛋白(hsp)gp9多肽的核酸的真核表达载体转染。本发明另外提供了在人类受治疗者中产生保护性免疫应答的方法，该方法包括向该受治疗者施用有效量的肿瘤细胞，所述肿瘤细胞用包含编码分泌形式的热休克蛋白(hsp)gp96多肽的核酸的真核表达载体转染。

根据一些优选的实施方案，gp96多肽是包含gp96多肽和免疫球蛋白信号肽(IgSP)的融合蛋白。任选地，IgSP选自由小鼠IgSP、大鼠IgSP、猪IgSP、猴IgSP、人IgSP组成的组。

根据一些优选的实施方案，gp96免疫被频繁地施用(例如，每天一次或每天两次)大约1天到大约6个月的一段时间。根据其他优选的实施方案，治疗性组合物以每剂20mg至2000mg的剂量被胃肠外施用。