[发明专利]用于预防和/或逆转新发作的自身免疫性糖尿病的基于微球的组合物

说明书

关于政府权益的陈述

本发明是在国立卫生研究院(National Institutes of Health)(NIH)提供的资助号为R21 DK49835-01的政府资助下做出的。政府在本发明中享有一定权利。

与相关申请的交叉引用

本申请要求2008年4月18日提交的美国临时专利申请No.61/046,034和2008年4月28日提交的美国临时专利申请No.61/048,246的优先权。每个上述申请的全部文本在此引为参考。

背景技术

总的来说，本公开涉及在NOD小鼠中预防和/或逆转自身免疫性糖尿病病症的反义方法。这包括通过注射用微球投送AS-寡核苷酸，以特别是在非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠模型中实现导致负调节活性的治疗效果。微球使用完全水性条件制造，其中微球包含一种或多种反义(AS)寡核苷酸。

微粒、微球和微囊是直径小于1毫米并可以小于100微米的固体或半固体粒子，其可以由各种不同材料形成，包括合成聚合物、蛋白和多糖。微球已经使用在许多不同应用中，主要是分离、诊断和药物投送。

可以使用许多不同技术从合成聚合物、天然聚合物、蛋白和多糖来制造这些粒子，这些技术包括相分离、溶剂蒸发、乳化作用和喷雾干燥。一般来说，聚合物形成这些微球的支撑结构，并且目标药物掺入到聚合物结构中。用于形成微球的示例性聚合物包括在Ruiz的美国专利No.5,213,812、Reid等的美国专利No.5,417,986、Tice等的美国专利No.4,530,840、Tice等的美国专利No.4,897,268、Tice等的美国专利No.5,075,109、Singh等的美国专利No.5,102,872、Boyes等的美国专利No.5,384,133、Tice等的美国专利No.5,360,610以及南方研究所(Southern Research Institute)的欧洲专利申请公开号248,531中所描述的乳酸和乙醇酸的同聚物和共聚物(PLGA)；嵌段共聚物例如在Illum的美国专利No.4,904,479中描述的908和泊洛沙姆(poloxamer)407；以及在Cohen等的美国专利No.5,149,543中描述的聚磷腈。使用例如这些聚合物产生的微球表现出不良的负载效能，通常只能将少量百分比的目标药物掺入到聚合物结构中。因此，为了获得治疗效果，通常必须给药显著量的这些类型的微球。此外，这些聚合物典型是疏水的，对目标药物的溶解具有负面影响。在这种情况下典型使用的聚合物包括聚乳酸乙醇酸(PLGA)。

医学团体的目标是将核酸投送到动物中的细胞，用于治疗各种疾病包括糖尿病。在许多方法中，可以通过加入转染试剂将核酸相对高效地投送到培养物中的细胞(体外)。此外，在体内，内源性核酸酶的存在导致当核酸被投送到动物时核酸被高速降解。

除了保护核酸免于核酸酶消化之外，核酸投送载体必须表现出低毒性、必须被细胞有效摄取，并具有明确的、容易制造的制剂。正如在临床试验中显示的，用于投送的病毒载体可以在体内导致严重不利的、甚至是致命的免疫应答。此外，这种方法具有在体内具有诱变效应的可能性。通过将核酸复合在不同制剂的脂类复合物(例如脂质体或阳离子脂类复合物)中投送，可能具有毒性效应。核酸与各种聚合物或与肽的复合显示出不一致的结果，并且这些制剂的毒性还没有被解决。核酸也已被囊封在聚合物基质中用于投送，但在这些情况下粒子具有广泛的尺寸范围，并且用于治疗性应用的有效性还没有被证实。这些以前的方法可能产生与本文所需的目标相反的效应，包括刺激免疫系统。例如，当PLGA被掺入到粒子中时，免疫系统受到PLGA存在的刺激。

因此，对于解决核酸投送中的问题存在着需求，并且对于开发微球和用于制造微球的新方法存在着持续的需求。关于微球的详细情况、特别是关于它们的制备和性质的详细情况，可以在Scott等的美国专利No.6,458,387、Woiszwillo等的美国专利No.6,268,053、No.6,090,925、No.5,981,719和No.5,599,719以及Woiszwillo的美国专利No.5,578,709和Brown等的美国专利申请公开号No.2006/0024240中发现。这些以及本文中指明的所有参考文献在此引为参考。

发明概述