[发明专利]用于受试者中活组织的增加和再生的组合物和方法

说明书

发明领域

本发明涉及适合用于受试者中活组织的增加(augmentation)和再生的组合物和方法。

发明背景

使用细胞移植的组织工程方法是已知，并且例如可牵涉例如开放性关节手术(例如，开放性膝手术)，在关节手术的情况下，涉及较长时期的相对残疾以使患者复原从而确保获得最佳结果。此类方法非常昂贵，并且需要多方面的医疗方法例如康复和物理疗法。

使用不同形式的支架技术的方法(其中将支架(具有或不具有在支架中生长的细胞)插入缺损)在进行完全由关节镜检查指导的细胞移植过程中遭遇到困难。

关节镜下自体细胞植入(Arthroscopic Autologous CellImplantation，称为使用小手术干预的AACI或ACI)是治疗软骨或骨缺损的外科手术，通过该外科手术将支架插入缺损处，同时相伴地使用针例如“钝”针或导管将细胞悬浮液或细胞混合物与前体固定剂(precursor fixative)一起施加入所述缺损处。通过关节镜显现和指导该植入步骤。

WO 2004/110512公开了可用于治疗哺乳动物中软骨或骨缺损的内窥镜法，其包括确定缺损位置和将软骨细胞、成软骨细胞、骨细胞和成骨细胞施加入软骨或骨缺损。将细胞与可固化支持材料例如可溶性凝血酶和纤维蛋白原或胶原混合物一起使用。预期对于凸关节或凹关节中的手术，可将多孔膜置于缺损部位，但一旦血纤蛋白/细胞混合物在合适的位置凝固时即其取出。WO 2004/110512中公开的方法使得组织能够在关节镜下修复，即不需要开关节手术(例如开膝手术)。

支架是可向其中掺入细胞的多孔结构。它们可由生物相容性、生物可降解性的材料组成并且可被加入至组织以在形成功能性组织的过程中指导细胞的组织、生长和分化。使用的材料可以是天然或合成来源的。

WO 2007/028169涉及用于通过细胞移植进行的组织工程的方法，其包括在缺损部位原位使用支架，其中只在将支架插入在组织缺损部位后才将治疗性细胞在适当的位置固定至支架内。

WO 2007/101443提供了用于本发明部分的方法和试剂盒的优选支架材料。

微粒已用作用于组织增加和支持的可注射支架。

WO 96/02209报导了用于与润滑液或凝胶结合以用于增加尿道括约肌的可注射生物相容性光滑表面化碳包被的金属颗粒(大小100-1000微米)。

Xu和Reid等人(Annals New York Academy of Sciences第944卷：144-159，2001))公开了使用直径20至40微米和100至300微米的多孔生物相容性和生物可降解的(PLGA)微载体珠粒(球)附着肝细胞瘤细胞以在培养物中形成三维细胞可降解的微载体集落。

Kang等人(J.Biomater.Sci.Polymer Edn，第17卷，No 8，pp925-939(2006)公开了PLGA微球体的制造和其作为用于兔子膝部软骨再生的可注射载体的用途。将珠粒过滤至30至80微米珠粒的范围内。弃去更小的珠粒，因为它们可在植入后迁移至远处的器官。

本发明提供了用于受试者中活组织的增加和再生的新型和改进型组合物。

附图概述

图1：实验1的光学显微镜检查、SEM和粒度分布。

图2：实验2的光学显微镜检查、SEM和粒度分布。

图3：实验3的光学显微镜检查、SEM和粒度分布。

图4：实验4的光学显微镜检查、SEM和粒度分布。

图5：实验5的光学显微镜检查、SEM和粒度分布。

图6：实验6的光学显微镜检查、SEM和粒度分布。

图7a：来自实验2的颗粒。

图7b：来自实验3的颗粒。

图8-I：与颗粒一起培养的成纤维细胞的中性红染色-活细胞被染成红色。

8-Ia：1周-10x；8-Ib：1周-40x；

8-Ic：2周-10x；8-Id：2周-40x；

8-Ie：4周-10x；8-If：4周-40x。

图8-II：与颗粒一起培养的肌细胞的中性红染色-活细胞被染成红色。

8-II a：4周-10x；8-IIb：4周-40x。

图8-III：无细胞的颗粒

8-IIIa：第1天-10x；S-IIIb：第7天-10x；

8-IIIc：第2周-10x；S-IIIcI：第2周-40x；

8-IIIe：第4周-10x；S-IIIf：第4周-40x。

图9：实验5-降解样品的分子量。