[发明专利]用于从生物材料中提取和检测脂溶性组分的方法

说明书

本发明涉及分析来自生物材料(尤其是食品)的脂溶性组分(尤其是染料)、富集所述组分并随后分析的方法。所述方法具体地包括提取和分离步骤和随后的分析步骤的组合。

本发明还涉及用于进行所述方法的分析试剂盒和分析设备。

根据本发明的方法由多个步骤组成。是关键性的并且表征本发明的两个步骤为：

·将生物材料样品采集进有助于脂溶性组分可提取性的溶剂中(样品制备步骤)。

·通过有机溶剂或溶剂混合物将脂溶性组分提取进提取混合物中，同时去除非脂溶性组分，还优化天然存在的组分与要研究的组分的提取关系(提取步骤)。

取决于要分析的物质，可以在分析之前进一步分离被提取的组分。

本发明的前景是溶解脂溶性组分和生物基质之间的复杂复合物，提供测定食物和饲料中的物质(在本文下文中也称作组分)的方法的分析试剂盒和用途。

对本发明的检测方法而言，所考虑的脂溶性组分为脂质(lipids)和类脂(lipoids)。这一组物质的特征是在水或水性溶液中缺乏溶解度及其在有机溶剂中的良好溶解度。这已知为亲脂性。除了主要脂质如甘油三酯、磷脂和胆固醇以外，这些物质包括大量物质，其中一些可能以非常小量存在，并且其化学结构方面差异非常大。这些包括脂溶性维生素如类视黄醇、维生素E、维生素D和维生素K。其它物质是类固醇，如例如激素、信息激素(pherohormones)和真菌毒素。考虑用于所述检测方法的其它物质是天然或合成来源的亲脂染料。这尤其涉及类胡萝卜素(β-胡萝卜素、α-胡萝卜素、角黄素、虾青素、叶黄素、番茄红素)，作为大量植物或动物产物或偶氮类合成(人工)染料的成分(Sudan G，Sudan Brown，Sudan R，Citrus Red No.2，Sudan Y ellow GRN，Sudan II，Oil Red O，Quinoline Y ellow SS，Alizarin Violet 3B，Solvent Blue 35，Quinizarine Green SS)。

天然和合成的染料被用于对不同应用的制品进行染色。它们的作用是给予某些光学品质特性。可以被染色的生物材料是蛋黄和蛋制品，固体糊状或液体形式的香料、香料混合物和香料制剂，肉和肉制品，鱼和鱼制品、水果和蔬菜汁和/或制剂，以及黄油或其它乳制品。用于人消耗的生物材料的染色可以通过饲料引入或在加工中引入。

经染色的制品不仅涉及食物和饲料，也涉及工业制品，例如化妆品制品。

脂质和类脂结合在生物膜中或与特异性或非特异性蛋白质结合。一个例子是细胞膜中脂质或类脂如维生素E或磷脂的富集，并针对动物和人细胞对其进行了描述。所述结合和亲脂性对提取提出了具体的要求。在动物或植物生物学基质中并入细胞膜或其它细胞结构也是一种提取问题。

分析生物材料的现代方法通常包括生物材料成分(constituent)以及组分(component)的分离(separation)、提取、离析(isolation)和/或富集。这些方法步骤在用于分离干扰或伪造结果的物质的定性和定量分析中均是不可或缺的。

另外，已知的检测方法是耗时和就设备而言昂贵的，特别是必须检测非常小量的组分时。另一方面，已知方法的大幅简化导致仅非常大的浓度能够被检测。

对食物和饲料安全性以及对检测有毒物质或伪造物质的提高的要求(特别是在国际商品贸易中)需要快速、灵敏和可靠的分析，优选地尽可能接近所述制品。因此，需要由尽可能少的工作步骤组成和/或具有很低的技术复杂性的方法。在这种情况下，期望使用下述方法，所述方法可以在一次性分析试剂盒的基础上应用。

在本文上下文中，提供了例如对用苏丹红伪造食物和饲料颜色的检测或类似有毒真菌毒素的检测。

因此，本发明的一个目的是提供用于提取内源或外源脂溶性物质的方法，所述方法的选择性足以溶解来自生物材料的具有可比较的少许复杂性的物质，例如复合固体基质，并且需要时能够借助于一次性分析试剂盒简单和迅速地应用。同时，使用稀释缓冲液，尽可能多的不同提取问题必须能够以下述方式被解决，使得所述方法被用于例如检测天然或合成来源的脂质和类脂物质的浓度。

通过权利要求1要求保护的方法、权利要求23要求保护的用途、权利要求27要求保护的分析试剂盒和权利要求30要求保护的光学分析仪器实现了所述目的。

一些优选的实施方案描述于附带的权利要求书中。所有权利要求的措辞通过引用并入本说明书中。