[发明专利]新型抗原结合二聚体-复合物及其制备方法和应用

权利要求书

1.稳定的NFD，其可通过包括浓缩包含至少一个单可变结构域的多肽的步骤的方法获得。

2.按照权利要求1的稳定的NFD，其中所述单可变结构域是纳米抗体诸如VHH，人源化VHH，亲合成熟的、稳定化的或另外改变的VHH或其构建体。

3.按照权利要求1的稳定的NFD，其中单可变结构域选自由SEQ IDNO：1，SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：5，SEQ IDNO：6，SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10组成的组。

4.按照权利要求1的稳定的NFD，其中单可变结构域选自由SEQ IDNO：1，SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：5，SEQ IDNO：6，SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10组成的组。

5.按照权利要求1的稳定的NFD，其中单可变结构域选自由SEQ IDNO：1，SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：5，SEQ IDNO：6，SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10组成的组，和由与SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：6，SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10中任一种具有至少70％同一性的功能性序列组成的组。

6.按照权利要求1的稳定的NFD，其中单可变结构域选自由SEQ IDNO：1，SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：5，SEQ IDNO：6，SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10组成的组，和由与SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：6，SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10中任一种具有至少70％同一性的功能性序列组成的组；且其中所述序列特异性结合其至少一种靶分子。

7.按照权利要求1-6中任一项的稳定的NFD，其中所述多肽基本由一个单可变结构域，多个单可变结构域，一个连接体或多个连接体组成。

8.按照权利要求1-7中任一项的稳定的NFD，其中所述浓缩步骤在蛋白A柱上进行且其中将大量多肽加载至所述柱上，例如2-5mg/ml树脂蛋白A。

9.按照权利要求1-8中任一项的稳定的NFD，其中所述NFD与其靶分子的解离常数与其相应单体构件与所述靶分子的解离常数大致相同。

10.按照权利要求1-8中任一项的稳定的NFD，其中不存在与其靶分子的特异性结合。

11.按照权利要求1-8中任一项的稳定的NFD，其中所述NFD与其靶分子的解离常数是100nM以下。

12.包含至少一个单可变结构域的多肽；其中所述至少一个单可变结构域可以形成如权利要求1-11中所述的NFD。

13.制备按照权利要求1-11中任一项的NFD的方法，包括具有有利于疏水性相互作用的条件的处理步骤。

14.制备如权利要求1-11中所述包含至少一个单可变结构域，例如纳米抗体的多肽的单体多肽的方法；其中制备所述多肽的每一步均不产生多于50％，优选40％，更优选30％，更优选20％，甚至更优选10％的相应NFD；且其中所述方法中的每一步均避免有利于疏水性相互作用的条件和/或其中所述方法避免这样的条件，其中所述单可变结构域部分解折叠，例如CDR3通过例如升高的温度诸如接近所述多肽解链温度的温度或例如37℃，在延长的时间，例如数周诸如例如4周内，部分解折叠。

15.药物制剂，包括i)包含易于二聚化的纳米抗体的多肽；和ii)多元醇。