[发明专利]复制条码筛选检测有效
| 申请号: | 200980106006.4 | 申请日: | 2009-08-21 |
| 公开(公告)号: | CN102203281A | 公开(公告)日: | 2011-09-28 |
| 发明(设计)人: | T·L·布鲁斯 | 申请(专利权)人: | 赛业(广州)生物科技有限公司 |
| 主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12Q1/70;C12N15/86 |
| 代理公司: | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人: | 蒋康铭 |
| 地址: | 510663 中国广东*** | 国省代码: | 广东;44 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 复制 条码 筛选 检测 | ||
1.由“复制条码筛选”(RBS)检测实验构成的方法,其目的在于分离出那些对处理具有应答倾向的细胞,但实际上未使细胞接受所述处理,该方法包括:
(a) 通过使每个细胞带有唯一遗传标识,或“条码”的方式修饰初始细胞群;
(b) 扩增这些具有唯一条码的细胞,使其增殖为多个具有相同条码的子细胞;
(c) 将细胞分成两组:处理组和预留组;
(d) 对处理组内的细胞进行处理,以鉴别应答阳性细胞,即表现出预期应答的细胞;
(e) 读取阳性细胞的条码;
(f) 回收预留组内具有相同条码的细胞。
2.根据权利要求1所述的方法,其中,细胞的条码化是通过将源自条码载体文库的DNA引入细胞实现的,以使每个细胞具有唯一的条码区。
3.根据权利要求2所述的方法,其中,条码载体以文库形式存在,在文库中,载体的各个拷贝具有相同的序列,随机条码区除外。
4.根据权利要求1所述的方法,其中,读取处理组中阳性细胞的条码,通过PCR扩增条码区随后对PCR产物测序回收其条码。
5.根据权利要求1所述的方法,其中,表达结合特定条码的小发卡RNA(shRNA)的敲除载体被引入预留组中,通过敲除存在于条码载体内的选择性报告基因(该基因含有shRNA结合区域)的表达的方式回收具有所述条码的细胞。
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