[发明专利]一种蛋白质相互作用的检测方法

权利要求书

1.一种蛋白质相互作用的检测方法，利用双分子荧光互补技术，其特征在于，基于橙红荧光蛋白，该检测方法包括以下步骤：

1）将橙红荧光蛋白切割成两个蛋白序列片段，分别为TN和TC，构成红色双分子荧光互补探针；

2）将两个蛋白序列片段分别构建到两个表达载体中，将待测的两个目标蛋白的DNA序列分别与TN和TC构建用于表达融合蛋白；

3）利用双分子荧光互补现象，将融合蛋白序列载体共转染细胞，使用光源及光学组件，在荧光显微镜观察刺激前后是否存在红色荧光；如果两目标蛋白存在相互作用，则TN和TC足够靠近，从而自发重组为完整荧光蛋白，产生红色荧光信号；如果没有或者只有极其微弱红色荧光，证明目标蛋白之间无相互作用；

所述橙红荧光蛋白为TagRFP，所述橙红荧光蛋白TagRFP的切割点为第154号氨基酸与第155号氨基酸之间。

2.一种蛋白质相互作用的检测方法，利用红色双分子荧光互补技术，其特征在于，基于远红荧光蛋白，该检测方法包括以下步骤：

1）将远红荧光蛋白切割成两个蛋白序列片段，分别为KN和KC，构成红色双分子荧光互补探针；

2）将两个蛋白序列片段分别构建到两个表达载体中，将待测的两个目标蛋白的DNA序列分别与KN和KC构建用于表达融合蛋白；

3）利用双分子荧光互补现象，将融合蛋白序列载体共转染细胞，使用光源及光学组件，在荧光显微镜观察刺激前后是否存在红色荧光；如果两目标蛋白存在相互作用，则KN和KC足够靠近，从而自发重组为完整荧光蛋白，产生红色荧光信号；如果没有或者只有极其微弱红色荧光，证明目标蛋白之间无相互作用；

所述远红荧光蛋白为mKate及其突变体mLumin，所述远红荧光蛋白mKate及其突变体mLumin的切割点为第154号氨基酸与第155号氨基酸之间。

3.根据权利要求1或2任意一项所述的一种蛋白质相互作用的检测方法，其特征在于，所述检测方法可以用于同步并行检测多对蛋白质相互作用。

4.根据权利要求1或2任意一项所述的一种蛋白质相互作用的检测方法，其特征在于，所述检测方法可以用于活体成像检测蛋白质相互作用。