[发明专利]丙型肝炎病毒IgG、IgM抗体联检试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物应用技术领域，特别涉及一种丙型肝炎病毒IgG、IgM抗体联检试剂盒及其制备方法。

背景技术

丙型肝炎病毒简称为HCV，在病毒分类上属于正链RNA病毒，呈球形，直径小于80nm(在肝细胞中为36～40nm，在血液中为36-62nm)。丙型肝炎是由HCV所引起，是严重威胁人类健康的传染病之一，由于至今尚无预防疫苗问世，也没有特效药物治疗，因此早期诊断是防止HCV传播的有效手段。丙型肝炎是通过输血或血制品、血透析、单采血浆还输血球、肾移植、静脉注射毒品、性传播、母婴传播等传染引起的。在预防丙肝的措施上，筛选献血员是重要一环，凡血中抗-HCV阳性或HCVRNA阳性均不能作为献血员，国外30-90％输血后肝炎为丙型肝炎，我国输血后肝炎中丙型肝炎占1/3。建立HCV快速、准确的检测方法是预防的关键所在。

IgM和IgG是人或动物体内最重要的两种抗体。当一种抗原(病毒或细菌)进入机体后，免疫应答中首先分泌的抗体是IgM抗体，它们在与抗原结合后启动补体的级联反应，同时还把入侵者相互连接起来，聚成一堆便于巨噬细胞的吞噬，因此IgM在机体的早期防御中起着重要的作用；而IgG抗体是血清免疫球蛋白的主要成分，它占总的免疫球蛋白的75％，是初级免疫应答中最持久、最重要的抗体，它仅以单体形式存在，大多是抗菌性、抗毒性和抗病毒抗体属于IgG，在抗感染中起到主力军作用，能够促进单核巨噬细胞的吞噬作用(调理作用)，中和细菌毒素的毒性(中和毒素)和病毒抗原结合使病毒失去感染宿主细胞的能力(中和病毒)。仅对IgG检测，不能说明患者是现症感染或既往感染，虽然IgM的检出率要比IgG的检出率低，但是IgM检测阳性基本说明患者是现症感染。由于IgM抗体半衰期较短，所以IgM的检测阴性并不能证明机体未受到感染，还需要检测半衰期较长，含量最高的IgG抗体，以明确诊断。因此，要明确诊断机体对特定抗原的免疫反应状态，可以同时检测机体内IgG、IgM抗体的存在。因此本发明提供一种丙型肝炎病毒IgG、IgM抗体联检试剂盒以明确诊断HCV感染。

目前单独检测丙型肝炎病毒IgG、IgM抗体的方法很多，例如酶联免疫吸附法(ELISA)、免疫胶体金渗滤法、乳胶凝集法、免疫荧光法(IFA)等。但还未有通过一次操作即可联检丙型肝炎病毒IgG、IgM抗体的方法。虽然分别单独检测丙型肝炎病毒IgG抗体和IgM抗体后，再综合分析检测结果对疾病的诊断并无影响，但操作过程繁琐，检测不够方便快捷。

本发明提供一种丙型肝炎病毒IgG、IgM抗体联检试剂盒及其制备方法，能够一次性检测丙型肝炎病毒IgG、IgM抗体，从而简化了操作过程，实现了快速检测的目的。本发明采用胶体金免疫层析法(Immunochromatography Assay)，这种方法开始于上个世纪90年代中期，是在免疫渗滤法的基础上发展起来的，是免疫亲和技术、印刷技术、免疫标记技术和层析技术的结合。这种方法目前已得到较为广泛的运用，它的基本原理是：利用胶体金标记一种抗原或抗体，相应的配对抗原或抗体包被在硝酸纤维素膜上，检测样品时，胶体金标记物和样品中的配体相结合形成复合物，然后再通过层析作用向上移动，与包被抗原或抗体结合而凝聚显色，从而实现对样品检测结果的判定。此方法操作简单、反应快速、敏感性高、特异性强、稳定性好，经济实用，适合于现场检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种方便、快捷、灵敏，用于检测丙型肝炎病毒IgG、IgM抗体的试剂盒，检测人类样本中丙型肝炎病毒IgG，IgM抗体，用于丙型肝炎病毒感染的辅助诊断和鉴别。

本发明提供了一种丙型肝炎病毒IgG，IgM抗体联检试剂盒。包括样品垫(1)、紧密连接于样品垫一端的含有标记HCV多表位复合抗原的胶体金垫(2)、与胶体金垫的另一端紧密相连的硝酸纤维素膜(3)和紧密连接于硝酸纤维素膜另一端的吸样垫(4)。硝酸纤维素膜包被了三条线，其中两条检测线(T₁，T₂线)，一条质控线(C线)。样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸样垫粘贴在PVC支撑板(5)上形成试剂条，试剂条也可以装入塑料卡中形成检测卡。其特征在于检测线为分别包被在硝酸纤维素膜上的鼠抗人IgM抗体(T₁线)、HCV多表位复合抗原(T₂线)；所述胶体金垫为胶体金标记的HCV多表位复合抗原玻璃纤维(或无纺布)；所述的底板为PVC板，样品垫为玻璃纤维或无纺布，吸样垫为吸水滤纸。

本发明还提供了一种丙型肝炎病毒IgG，IgM抗体联检试剂盒的制备方法，包括以下步骤：