[发明专利]单纯疱疹病毒Ⅰ、Ⅱ型IgM抗体联检试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物应用技术领域，特别涉及一种单纯疱疹病毒I、II型IgM抗体联检试剂盒及其制备方法。

背景技术

单纯疱疹病毒(herpes simplex virus)属于疱疹病毒科a病毒亚科，病毒质粒大小约180nm。根据抗原性的差别目前把人类单纯疱疹病毒分为两型，即单纯疱疹病毒I型(HSV-I)和单纯疱疹病毒II型(HSV-II)。I型疱疹病主要是通过呼吸道、皮肤和粘膜密切接触传播，感染腰以上部位的皮肤粘膜和器官。如引起口唇粘膜、鼻前庭、眼结膜、咽喉部的炎症及疱疹，口和口周围发生的疱疹，99％是由I型疱疹病毒感染引起的。II型疱疹病毒主要存在于女性宫颈、阴道、外阴皮肤及男性的阴茎、尿道等处，是引起生殖器发炎和疱疹的罪魁祸首。据有关统计资料显示，生殖器疱疹的病原体90％为II型疱疹病毒。单纯疱疹病毒是可以导致畸胎的传染病的病原体，若孕妇感染单纯疱疹病毒，妊娠早期可引起死胎、流产、小头畸形、脑内钙化等神经系统的畸形，其症状与巨细胞病毒相似。因此，建立单纯疱疹病毒I、II型快速、准确的检测方法是预防的关键所在。

当一种抗原(病毒或细菌)进入机体后，免疫应答中首先分泌的抗体是IgM抗体，它们在与抗原结合后启动补体的级联反应，同时还把入侵者相互连接起来，聚成一堆便于巨噬细胞的吞噬，因此IgM在机体的早期防御中起着重要的作用，IgM的检测具有重要的参考意义。

目前单独检测单纯疱疹病毒I或II型IgM抗体的方式很多，例如酶联免疫吸附法(ELISA)、免疫胶体金渗滤法、乳胶凝集法、免疫荧光法(IFA)等。但还未有通过一次操作即可联检单纯疱疹病毒I、II型IgM抗体的方法。虽然分别单独检测单纯疱疹病毒I和II型IgM后，再综合分析检测结果对疾病的诊断并无影响，但操作过程繁琐，检测不够方便快捷。

本发明提供一种单纯疱疹病毒I、II型IgM抗体联检试剂盒及其制备方法，能够一次性检测单纯疱疹病毒I、II型IgM抗体，从而简化了操作过程，实现了快速检测的目的。

发明内容

本发明的目的是提供一种方便、快捷、灵敏，用于检测单纯疱疹病毒I、II型IgM抗体的试剂盒，检测人类样本中单纯疱疹病毒I、II型IgM抗体，用于单纯疱疹病毒感染的辅助诊断和鉴别。

本发明提供了一种单纯疱疹病毒I、II型IgM抗体联检试剂盒。包括样品垫(1)、紧密连接于样品垫一端的胶体金垫(2)、与胶体金垫的另一端紧密相连的硝酸纤维素膜(3)和紧密连接于硝酸纤维素膜另一端的吸样垫(4)，硝酸纤维素膜包被了三条线，其中两条检测线(T₁，T₂线)，一条质控线(C线)，样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸样垫粘贴在底板(5)上形成试剂条，试剂条也可以装入塑料卡中形成检测卡，其特征在于检测线为分别包被在硝酸纤维素膜上的单纯疱疹病毒I型抗原(T₁线)、单纯疱疹病毒II型抗原(T₂线)；所述胶体金垫为胶体金标记的鼠抗人IgM单抗玻璃纤维(或无纺布)；所述的底板为PVC板，样品垫为玻璃纤维或无纺布，吸样垫为吸水滤纸。

本发明还提供了一种单纯疱疹病毒I、II型IgM抗体联检试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

(1)制备鼠抗人IgM单抗

采用单克隆抗体制备法，取杂交瘤细胞株在体外常规培养、传代，用人源性的IgM注射BALB/C小鼠腹腔，收取腹水，以亲和层析法提纯鼠抗人IgM单抗；

(2)制备单纯疱疹病毒I型抗原与单纯疱疹病毒II型抗原

分别选取单纯疱疹病毒I型、单纯疱疹病毒II型敏感细胞株，接种单纯疱疹病毒I型毒株、单纯疱疹病毒II型毒株，经细胞培养，获取抗原。

(3)制备胶体金颗粒

取0.01％的氯金酸水溶液100ml，加热煮沸。根据需要迅速加入1％枸橼酸三钠水溶液1.0ml，继续煮沸约5min，出现橙红色。这样制成的胶体金颗粒的大小为20-40nm。

(4)胶体金垫的制备