[发明专利]一种免疫层析快速试剂盒及其生产制备

说明书

技术领域

本发明涉及了一种免疫层析试纸条、其制备方法及含有所述试纸条的试剂盒。具体而言，本发明涉及一种基于上转发光技术的免疫层析试纸条，采用冻干法生产所述免疫层析试纸条的生产方法，以及包含所述免疫层析试纸条的检测试剂盒。本发明还涉及了应用上述生产方法生产的用于检测甲胎蛋白、C反应蛋白的免疫层析试纸条及其试剂盒。

背景技术

中国专利申请200410034104.0中记载了一种被称为上转发光材料(UCP)的物质以及应用该材料作为标记物的免疫层析试纸条。

虽然上转发光材料具有高灵敏性、高稳定性、高简易性、高灵活性和高安全性等诸多优点，使其在作为生物标记物方面具有广泛的应用前景。但是至今仍然没有一种商品化的上转发光法定量检测试纸可以供临床使用，原因是在于现有的基于上转发光法的免疫层析试纸条无法满足对定量检测试纸的生产质量要求。如中国专利申请200410034104.0所述，以往UPT(上转发光技术，Up-Converting Phosphor Technology)快速试纸的制备方法中结合垫或结合物释放垫是采用烘干方法。由于UCP颗粒容易团聚，导致烘干结合垫后裁剪的变异过大，批内精密度低，变异系数(CV)大于15％。变异系数CV常被用于表示精密度，包括批内和批间变异系数两种(分别对应于批内精确度和批间精确度)，CV越小精密度越高。批间精密度的CV值一般大于批内，低含量标本的CV值一般大于高含量标本。最常见的精密度评价是对稳定的样品作多次测定，求这些重复测定值的均值和标准差s，以及变异系数CV。重复次数一般要求10-20次。若在一批内的重复测定，这是批内精密度；卫生部发的《临床化学体外诊断试剂盒质量检验总则》WS/T124-1999中有这方面的检测和计算方法的规定。一般临床免疫试剂的批内和批间CV均应该≤15％。

医院实验室对病人标本检测时，由于该行业的沿袭特点，一直是对每份标本只作一次检测发出报告。因此国际上将精密度性能列为实验方法、仪器或试剂盒分析性能的第一位。检测结果必须具重现性，也即具有良好的精密度。因此急需开发出具有较高精密度的基于上转发光法技术的免疫层析试纸条。

甲胎蛋白(α-Fetoprotein，AFP)是1956年Bergstrandh和Czar在人胎儿血清中发现的一种专一性的甲种球蛋白，是胚胎早期的主要蛋白质，来源于胎儿肝脏和卵黄囊。胎儿的AFP浓度非常高，可达1-10mg/ml，但在出生后迅速下降，生后2个月只有痕量AFP可检测到，并几乎完全被血清白蛋白所替代。甲胎蛋白是原发性肝细胞癌(PHC)较为特异的肿瘤标志物，70％以上的患原发性肝细胞癌病人早期血清中AFP含量升高。同时在其它一些恶性肿瘤中也能发现AFP水平升高，如睾丸癌。对血清中AFP含量的检测可以用作肝癌高发区普查以及肝癌的早期临床诊断，同时也可以评定肝癌的治疗效果和判断预后。

C-反应蛋白(CRP)是参与炎症的主要时机反应蛋白，在各种急性炎症、组织损伤、心肌梗塞、手术创伤、放射性损伤等疾病发作后数小时迅速升高，并有成倍增长之势。病变好转时，又迅速降至正常，其升高幅度与感染的程度呈正相关。C-反应蛋白还可用于细菌和病毒感染的鉴别诊断。一旦发生炎症，C-反应蛋白水平即升高，而病毒性感染C-反应蛋白大都正常。

近年来发现C-反应蛋白浓度甚至在正常范围内的轻度升高都与心血管疾病发生的危险性增加有关，可以推测以后心肌梗死事件发生的可能性。超敏C-反应蛋白是心脑血管疾病中的一项独立风险预测指标，可以敏感地预测糖尿病合并心、脑血管事件的危险发生率。

AFP和CRP都是常见的POCT检测指标。应用上转发光免疫分析技术开发AFP及CRP快速检测免疫层析试纸条应用于床旁快速检测(POCT)领域有临床应用价值，但是批内精密度(CV)应不高于15％才能满足临床使用需要。因此需要具有可以应用于POCT检测的高精密度，基于上转发光技术的成品AFP及CRP快速检测免疫层析试剂条及试剂盒。

发明内容

为了克服上述现有技术中的不足，本发明提供一种基于上转发光技术的采用经冻干法制备的结合垫或结合物释放垫的免疫层析试纸条，具有精密度高即变异系数CV≤15％的特点。

本发明的试纸条是检测原理是通过一系列表面修饰与活化，上转换发光材料UCP(Up-Converting Phosphor，UCP)颗粒可与生物活性分子相结合，利用UPT生物传感器，对在层析过程中通过特异免疫反应结合于特定区域(检测带与质控带)的UCP颗粒进行扫描分析，从而利用由UPT快速定量检验系统实现精确定量或定性。