[发明专利]一种高效分泌表达重组角质酶的基因工程菌及其构建方法有效
| 申请号： | 200910260984.6 | 申请日： | 2009-12-18 |
| 公开（公告）号： | CN101792729A | 公开（公告）日： | 2010-08-04 |
| 发明（设计）人： | 吴敬;陈晟;宿玲恰;陈坚;吴丹 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12N9/16;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京汇信合知识产权代理有限公司 11335 | 代理人： | 王秀丽 |
| 地址： | 214122 江苏省无锡蠡湖大道*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高效 分泌 表达 重组 角质 基因工程 及其 构建 方法 | ||
1.一种高效分泌表达重组角质酶的基因工程菌，其特征在于，该基因工程菌是携带2种重组质粒的大肠杆菌BL21(DE3)，所述重组质粒为携带α-溶血素(α-hlyA)途径中hlyBD基因的质粒pSTV28及含有角质酶-hlyAs基因的质粒pET20b(+)。
2.权利要求1所述的基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
第一步：构建重组质粒
将大肠杆菌α-溶血素(α-hlyA)途径中的hlyBD基因克隆到pSTV28，构建重组质粒hlyBD/pSTV28；通过重叠PCR得到编码角质酶-hlyAs的基因序列，将其克隆到pET20b(+)，构建重组质粒Tfu_0883-hlyAs/pET20b(+)；
第二步：构建高效表达重组角质酶的基因工程菌
将构建的重组质粒分步转化入大肠杆菌BL21(DE3)，得到高效表达重组角质酶的基因工程菌。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，构建重组质粒hlyBD/pSTV28用到如下引物：
引物P1：5’-CggCgAgCTCggATTCTTgTCATAAAATTg-3’
引物P2：5’-CCACggATCCTTAACgCTCATgTAAAC-3’。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，构建重组质粒Tfu_0883-hlyAs/pET20b(+)用到如下引物：
引物P3：5’-gTAATCCATATggCCAACCCCTACgAgCgC-3’
引物P4：5’-gACTTCCATAggCTAAgAACgggCAggTggAg-3’
引物P5：5’-CTCCACCTgCCCgTTCTTAgCCTATggAAgTC-3’
引物P6：5’-CCgCTCgAgTTATgCTgATgCTgTCAAAg-3’ 。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于江南大学，未经江南大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/200910260984.6/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
