[发明专利]区分莱姆病病原基因型的试剂及方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于区分某种病原的基因类型的试剂方法，以及这种试剂的使用方法，更确切讲，本发明是一种用于区分莱姆病病原基因型的试剂和其使用方法。

背景技术

莱姆病(Lyme disease)又称莱姆包柔体病或莱姆疏螺旋体病，是一种蜱传性的自然疫源性人兽共患螺旋体病，因首次在美国康涅狄格州的莱姆镇发现而得名。目前已在全球30多个国家和地区报告有本病和本病的自然疫源地存在，年发病人数在30万左右，仍有不断增多的趋势，在美国有“第二艾滋病”之称(Gratz N.Emerging and resurging vector-borne disease.Ann Rev Entomol，1999，44：51)。1992年，世界卫生组织(WHO)将此病列为重点防治研究对象。我国于1986年首次在黑龙江省海林县林区发现了该病，到目前，我国至少30个省(区、市)均已发现有莱姆病分布，每年新发病例高达万余例，某些省份林区的发病率在1-40％。

人感染莱姆病后的临床症状主要表现为慢性炎症性多系统损伤，除皮肤慢性游走性红斑、关节炎和慢性萎缩性肢皮炎外，常常会伴有心脏和神经系统的损伤，从而引起脑膜炎、路神经炎、运动及感觉神经根炎、神经丛炎、多发单神经炎小脑共济失调等等症状，严重影响人类健康。伯氏疏螺旋体的基因型与莱姆病的致病性和临床表现是密切相关的，不同的基因型致病性不同，产生的临床症状也不同。莱姆病的病原体为伯氏疏螺旋体，可分为11个基因型或群，我国已发现并报道的莱姆病螺旋体主要是狭义伯氏疏螺旋体(Borreliaburgdorferi sensus stricto)、嘎氏疏螺旋体(B.afzelii)和伽氏疏螺旋体(B.garinii)三个基因型。对莱姆病病原分离株进行基因型的鉴定在流行病学、临床、诊断、治疗和疫苗研制方面具有重要的指导意义。

到目前为止，区分莱姆病病原基因型的方法主要以聚合酶链式反应(PCR)、限制性片段长度多态性(RFLP)和反向线状印迹(RLB)方法为主，但是PCR、RFLP以及RLB在区分本病原时需要复杂的系统，对操作实验要求较高，现有技术中进行莱姆病分型可参考以下文献：Rauter C，Meuller M，Diterich I，et al.Critical evaluation of urine-based PCR assay for diagnosis of Lyme borreliosis.ClinDiag Lab Immunol，2005，12：910-917；Morán-Cadenas F，Schneider H，et al.，Acomparison of two DNA extraction approaches in the detection of Borreliaburgdorferi sensu lato from live Ixodes ricinus ticks by PCR and reverse line blotting.Vector Borne Zoonotic Dis.2007；7(4)：555-561)；Daniele Postic，Marc V.Assous，Patrick A.D.Grimont，Guy Baranton.Diversity of Borrelia burgdorferi Sensu Latoevidenced by restriction fragment length polymorphism of rrf(5S)-rrl(23S)intergenic spacer amplicons.International Journal of Systematic Bacteriology，1994，44(4)：743-752。

发明内容

本发明提供一种区分和鉴定莱姆病病原伯氏疏螺旋体的检测试剂，以及这种试剂的使用方法。

本发明的用于区分莱姆病病原基因型的试剂中至少有：

a.狭义伯氏疏螺旋体LAMP特异性引物；

b.嘎氏疏螺旋体LAMP特异性引物；

c.伽氏疏螺旋体LAMP特异性引物。

本发明的用于区分莱姆病病原基因型的试剂中各特异性引物序列为：

a.狭义伯氏疏螺旋体LAMP特异性引物为：

F3：5’-tagcagccttgacgagaa-3’

B3：5’-tttgacctagatcgtcagaa-3’

FIP：5’-gccgtctttgtttttttctttgcttttttcagcgtttcagtagatttgc-3’