[发明专利]区分莱姆病病原基因型的试剂及方法

权利要求书

1.一种用于区分莱姆病病原基因型的试剂，其特征是试剂中至少有：

a.狭义伯氏疏螺旋体LAMP特异性引物；

b.嘎氏疏螺旋体LAMP特异性引物；

c.伽氏疏螺旋体LAMP特异性引物。

2.权利要求1所述的：

a.狭义伯氏疏螺旋体LAMP特异性引物为：

F3：5’-tagcagccttgacgagaa-3’

B3：5’-tttgacctagatcgtcagaa-3’

FIP：5’-gccgtctttgtttttttctttgcttttttcagcgtttcagtagatttgc-3’

BIP：5’-gtagacaagcttgagcttaaaggatttttttgtcagcttttacgcctt-3’；

b.嘎氏疏螺旋体LAMP特异性引物为：

F3：5’-gccaaaacattagtgtcaaga-3’

B3：5’-ggttccttcttttacttccaatg-3’

FIP：5’-catggtttttgcagacaattcaccttttgttctaaagacaaaacatcaacaga-3’

BIP：5’-atacagaaatgaaaagcgatggaacttttagctacttttccttcaagagt-3’；

c.伽氏疏螺旋体LAMP特异性引物为：

F3：5’-ttcaacgcaaaaggtgaat-3’

B3：5’-caactgttatttctccagagtt-3’

FIP：5’-ccggttccatcgctttttatttctgttttgaaaaaacaatactaagagcaaacg-3’

BIP：5’-aagactttgctcttgaaggaacttttttgcttaaaacaacagtgcc-3’。

3.权利要求1或2所述的用于区分莱姆病病原基因型的试剂的使用方法，其特征是将待检的蜱进行研磨，然后离心沉淀，取上清液；或者从待检的动物或人提取组织或关节滑液或血液样品，用所得到的上清液或组织样品培养莱姆病病原螺旋体，再将培养液离心，取沉淀提取基因组DNA，将所提取的基因组DNA分为三份，在LAMP反应缓冲液中分别加入狭义伯氏疏螺旋体特异性引物、嘎氏疏螺旋体特异性引物和伽氏疏螺旋体特异性引物，再分别在每个加有特异性引物的LAMP反应缓冲液中加入前述提取的DNA样品、灭菌超纯水以及BstDNA聚合酶，然后进行LAMP扩增，取扩增产物以TAE为缓冲液，在琼脂糖凝胶中进行电泳检测，根据电泳检测结果的泳道中是否存在的特异性条带确定被检样品的莱姆病病原基因型。

4.权利要求1或2所述的用于区分莱姆病病原基因型的试剂的使用方法，其特征是将待检的蜱进行研磨，然后离心沉淀，取上清液；或者从待检的动物或人提取组织或关节滑液或血液样品，用所得到的上清液或组织样品培养莱姆病病原螺旋体，再将培养液离心，取沉淀提取基因组DNA，将所提取的基因组DNA分为三份，在LAMP反应缓冲液中分别加入狭义伯氏疏螺旋体特异性引物、嘎氏疏螺旋体特异性引物和伽氏疏螺旋体特异性引物，再分别在每个加有特异性引物的LAMP反应缓冲液中加入前述提取的DNA样品、灭菌超纯水以及BstDNA聚合酶，然后进行LAMP扩增，在各扩增产物中加入Mg²⁺试剂，根据相应试管内液体是否产生浑浊或白色沉淀的阳性反应，确定被检样品的莱姆病病原基因型。

5.权利要求1或2所述的用于区分莱姆病病原基因型的试剂的使用方法，其特征是将待检的蜱进行研磨，然后离心沉淀，取上清液；或者从待检的动物或人提取组织或关节滑液或血液样品，用所得到的上清液或组织样品培养莱姆病病原螺旋体，再将培养液离心，取沉淀提取基因组DNA，将所提取的基因组DNA分为三份，在LAMP反应缓冲液中分别加入狭义伯氏疏螺旋体特异性引物、嘎氏疏螺旋体特异性引物和伽氏疏螺旋体特异性引物，再分别在每个加有特异性引物的LAMP反应缓冲液中加入前述提取的DNA样品、灭菌超纯水以及BstDNA聚合酶，然后进行LAMP扩增，在各扩增产物中加入SYBR Green I，根据相应试管是否呈绿色的阳性反应确定被检样品的莱姆病病原基因型。