[发明专利]一种检测人类DNA修复酶基因多态性的芯片及其制备

权利要求书

1.一种检测人类DNA修复酶类基因多态性的玻璃基因芯片，包括玻璃基片和阵列式分布于玻璃基片上的寡核苷酸探针与对照及空白的点涂层，其中，所述的玻璃基片是经醛基化处理的玻璃片，所述的寡核苷酸探针是6条不同位点的DNA修复酶基因特异性检测探针，所述的对照是1条阳性对照探针和3条阴性对照探针，所述的空白是空白点样液对照；其特征在于：

所述的6条不同位点的DNA修复酶基因特异性检测探针的基因序列分别是：

(XRCC1-194)-w：5’-(NH2)-(CH2)6-Pol(dT)15-AAGAAGTCGGCCTAGTTG；

(XRCC1-194)-m：5’-(NH2)-(CH2)6-Pol(dT)15-AAGAAGTCGAGGTAGTTG；

(XRCC1-399)-w：5’-(NH2)-(CH2)6-Pol(dT)15-ACGGGAGGGTCTCCATT；

(XRCC1-399)-m：5’-(NH2)-(CH2)6-Pol(dT)15-ACGGGAGGGCCTCCATT；

(XPD-312)-w：5’-(NH2)-(CH2)6-Pol(dT)15-CACGACGGGTTGCTTCA；

(XPD-312)-m：5’-(NH2)-(CH2)6-Pol(dT)15-CACGACGGGCTGCTTCA；

所述1条阳性对照探针的基因序列是：

β-actin：5’-(NH2)-(CH2)6-Pol(dT)15-TACTCTAACCGTACCGA；

所述3条阴性对照探针的基因序列分别是：

(XRCC1-194)CK：5’-(NH2)-(CH2)6-Pol(dT)15-AAGAAGTCGCGGTAGTTG；

(XRCC1-399)CK：5’-(NH2)-(CH2)6-Pol(dT)15-ACGGGAGGGGCTCCATT；

(XPD-312)CK：5’-(NH2)-(CH2)6-Pol(dT)15-CACGACGGGGTGCTTCA；

上述每种探针与对照及空白分别以2×2方式在玻璃基片表面阵列排布4个平行的点涂层，每个点涂层的直径为0.15mm，同种探针或对照或空白点涂层间距为0.4mm，不同探针或对照点涂层间距为0.8mm；芯片点涂层阵列总面积为3.5mm×6mm。

2.权利要求1所述检测人类DNA修复酶类基因多态性的玻璃基因芯片的制备方法，步骤是：

(1)玻片处理：取未经化学修饰的常规玻璃片裸片以体积百分比浓度为5％～10％戊二醛水溶液浸泡0.5～1.5小时，得到醛基化的玻璃片作为芯片的基片；

(2)确定探针：根据DNA修复酶基因XRCC1、XPD基因多态性位点基因序列，选择确定6条特异性检测探针，其基因序列分别是：

(XRCC1-194)-w：5’-(NH2)-(CH2)6-Pol(dT)15-AAGAAGTCGGCCTAGTTG；

(XRCC1-194)-m：5’-(NH2)-(CH2)6-Pol(dT)15-AAGAAGTCGAGGTAGTTG；

(XRCC1-399)-w：5’-(NH2)-(CH2)6-Pol(dT)15-ACGGGAGGGTCTCCATT；

(XRCC1-399)-m：5’-(NH2)-(CH2)6-Pol(dT)15-ACGGGAGGGCCTCCATT；

(XPD-312)-w：5’-(NH2)-(CH2)6-Pol(dT)15-CACGACGGGTTGCTTCA；

(XPD-312)-m：5’-(NH2)-(CH2)6-Pol(dT)15-CACGACGGGCTGCTTCA；

选择确定1条阳性对照探针，其基因序列是：

β-actin：5’-(NH2)-(CH2)6-Pol(dT)15-TACTCTAACCGTACCGA；

选择确定3条阴性对照探针，其基因序列分别是：

(XRCC1-194)CK：5’-(NH2)-(CH2)6-Pol(dT)15-AAGAAGTCGCGGTAGTTG；

(XRCC1-399)CK：5’-(NH2)-(CH2)6-Pol(dT)15-ACGGGAGGGGCTCCATT；

(XPD-312)CK：5’-(NH2)-(CH2)6-Pol(dT)15-CACGACGGGGTGCTTCA； 

(3)芯片制备：将上述选择的人类DNA修复酶类基因多态性特异性检测探针，阳性对照探针和阴性对照探针，以poly(dT)15作为连接臂，并在探针5’段加入带氨基的六碳基团，以3×SSC作为稀释液将上述探针分别稀释为10μM，以点样液为空白对照，以生物芯片点样仪Pixsys5500配以SMP3点样针接触式点制在所述的醛基化玻璃基片上，探针排布由图1所示，其中每种探针与对照及空白的点涂层以2×2方式在玻璃基片表面点制4个平行的点涂层，每个点涂层的直径为0.15mm，同种探针或对照或空白点涂层间距为0.4mm，不同探针或对照点涂层间距为0.8mm；芯片点涂层阵列总面积为3.5mm×6mm；将点制后的芯片平放于紫外交联仪内，4500J/cm²交联3min，得所述检测人类细胞DNA修复酶类基因多态性的玻璃基因芯片。