[发明专利]使用菲涅尔双棱镜产生多层光片的荧光显微方法及装置

权利要求书

1.一种使用菲涅尔双棱镜产生多层光片的荧光显微方法，其特征在于： 其包括以下步骤：

步骤1]将一平行光束(13)沿菲涅尔双棱镜(3)的底面垂直入射，在菲 涅尔双棱镜(3)后方放置透镜L₁(4)和透镜L₂(5)，透镜L₁(4)和透镜 L₂(5)组成望远镜系统，在透镜L₂(5)后方放置一玻璃片(6)，在玻璃片(6) 后方形成多层光片光场；

步骤2]经荧光染料标记的样品放置于多层光片光场中；

步骤3]具体步骤如下：

步骤31]上下移动显微物镜(9)，CCD相机(11)通过显微物镜(9)采 集样品不同深度的一系列二维切面图像并存储在计算机(12)中；

步骤32]调节玻璃片(6)与水平面之间的夹角，从而改变平行光束(13) 半个波长的相位差，再次上下移动显微物镜(9)，CCD相机(11)通过显微 物镜(9)采集样品不同深度的另一组二维切面图像并存储在计算机(12)中；

步骤33]将两次获得的二维切面图像数据叠加处理，得到样品完整的三维 荧光图像信息。

2.一种使用菲涅尔双棱镜产生多层光片的荧光显微方法，其特征在于：

步骤1]将一平行光束(13)沿菲涅尔双棱镜(3)的底面垂直入射，在菲 涅尔双棱镜(3)后方放置透镜L₁(4)和透镜L₂(5)，透镜L₁(4)和透镜 L₂(5)组成望远镜系统，在透镜L₂(5)后方放置一玻璃片(6)，在玻璃片(6) 后方形成多层光片光场；

步骤2]经荧光染料标记的样品放置于多层光片光场中；

步骤3]具体步骤如下：

步骤31]改变望远镜系统的扩束比来改变多层光片的间距，上下移动显微 物镜(9)，CCD相机(11)通过显微物镜(9)采集样品不同深度的一系列二 维切面图像并存储在计算机(12)中；

步骤32]调节玻璃片(6)与水平面之间的夹角，从而改变平行光束(13) 半个波长的相位差，再次上下移动显微物镜(9)，CCD相机通(11)过显微 物镜(9)采集样品不同深度的另一组二维切面图像并存储在计算机(12)中；

步骤33]将两次获得的二维切面图像数据叠加处理，得到样品完整的三维 荧光图像信息。

3.一种使用菲涅尔双棱镜产生多层光片的荧光显微装置，包括平行光束 (13)、光片产生系统、样品池(8)和图像采集系统，其特征在于：所述光片 产生系统包括菲涅尔双棱镜(3)，所述菲涅尔双棱镜(3)的底面朝向平行光 束(13)，所述样品池(8)放置在菲涅尔双棱镜(3)后方的干涉区域，所述 荧光显微装置包括放置在菲涅尔双棱镜(3)和样品池(8)之间的透镜L₁(4) 和透镜L₂(5)，所述透镜L₁(4)和透镜L₂(5)构成望远镜系统。

4.根据权利要求3所述的使用菲涅尔双棱镜产生多层光片的荧光显微装 置，其特征在于：所述荧光显微装置包括放置在透镜L₂(5)和样品池(8)之 间的玻璃片(6)。

5.根据权利要求4所述的使用菲涅尔双棱镜产生多层光片的荧光显微装 置，其特征在于：所述图像采集系统包括计算机(12)以及依次设置在样品池 (8)上方的显微物镜(9)、滤光片(10)和CCD相机(11)。