[发明专利]一种基于金磁微粒进行免疫沉淀反应的方法

权利要求书

1.一种基于金磁微粒进行免疫沉淀反应的方法，其特征在于，它的实现 步骤包括：

（1）抗体的固定：选取金磁微粒作为反应的固相载体，将目标生物物 质的特异性抗体直接偶联在金磁微粒的表面；所述将目标生物物质的 特异性抗体偶联在金磁微粒表面的方法包括：

（1.1）金磁微粒预处理：

取金磁微粒，置于磁性分离器上，磁性分离，弃上清； 加入偶联缓 冲液，轻摇重悬，置于磁性分离器上，磁性分离，弃上清，即得到预 处理好的金磁微粒；

（1.2）偶联抗体：

取目标生物物质的特异性抗体，加入偶联缓冲液稀释，再加入至预处 理好的金磁微粒中，置于摇床中，0～37℃条件下，充分反应10min～ 30min，磁性分离，弃上清；加入清洗缓冲液，轻摇重悬，磁性分离， 弃上清；加入保存缓冲液，2～8oC保存备用；

（2）稀释目的生物样品：

取目的生物样品，加入反应缓冲液稀释，保存备用；

（3）免疫沉淀反应：

（3.1）前处理：

取上述步骤（1）中固定了目标生物物质的特异性抗体的金磁微粒，置 于磁性分离器上，磁性分离，弃上清； 

（3.2）反应：

加入上述步骤（2）中稀释好的目的生物样品，混合均匀，0～37℃条 件下，充分反应5min～60min，磁性分离，弃上清，即为含有免疫沉淀 复合物的磁性微粒复合物；

（4）免疫沉淀复合物的洗脱：

取上述步骤（3.2）中的磁性微粒复合物，加入洗脱缓冲液，混合均匀 ，0～37℃条件下，充分反应5min～60min，磁性分离，移取分离后上 清，即为所需 的免疫沉淀复合物；

所述基于金磁微粒进行免疫沉淀反应的方法还包括目标生物物质的特 异性抗体的亲和配体的固定：

步骤（1.2）中，在将目标生物物质的特异性抗体加入预处理好的金磁 微粒中偶联之前，先加入目标生物物质的特异性抗体的亲和配体，0～ 37℃条件下，充分反应10min～30min，磁性分离，弃上清；再加入清 洗缓冲液清洗，磁性分离，弃上清；

所述基于金磁微粒进行免疫沉淀反应的方法还包括磁性微粒的再生和 保存步骤：

用再生缓冲液清洗上述步骤（3.2）免疫反应后的金磁微粒，将吸附到 金磁微粒上的目标生物物质的特异性抗体从金磁微粒上洗脱下来，得 到再生后的金磁微粒，再加入保存缓冲液，2oC～8oC保存备用；

所述基于金磁微粒进行免疫沉淀反应的方法还包括金磁微粒的封闭步 骤：

在步骤（1.2）金磁微粒与目标生物物质的特异性抗体固定之后，步骤 （3）免疫沉淀反应之前，先加入封闭剂，在0～37℃条件下，摇床中 充分反应2h，磁性分离，弃上清；再加入清洗缓冲液清洗，磁性分离 ，弃上清，重复清洗至少三次。

2.根据权利要求1所述的基于金磁微粒进行免疫沉淀反应的方法，其特征 在于：所述的目标生物物质的特异性抗体的亲和配体为蛋白A或蛋白G 。

3.根据权利要求1所述的基于金磁微粒进行免疫沉淀反应的方法，其特征 在于：

所述偶联缓冲液是0.005M～1M的pH7.0～9.0的Tris-HCl缓冲液，或者 是0.005M～1M的pH9.0～11.0的碳酸盐缓冲液，或者是0.005 M～1M的 pH5.6的醋酸盐缓冲液，或者是0.005M～1M的pH3.0～7.0的柠檬酸盐缓 冲液，或者是0.005M～1M的pH7.0～9.0的TBS缓冲液，或者是0.005M～ 1M的pH3.0～7.0的TE缓冲液，或者是0.5×～10×的pH5.0～8.0的PBS 缓冲液；

所述清洗缓冲液为含0.02～0.2％吐温的上述偶联缓冲液；

所述封闭剂是偶联缓冲液与1%～10%外加成份的混合溶液，外加成份是 牛血清白蛋白、赖氨酸、脱脂奶粉、乙醇胺和动物血清中的一种或多 种的混合物；

所述反应缓冲液是0.005M～1M的pH7.0～9.0的Tris-HCl缓冲液；

所述洗脱缓冲液是0.01M～1M的pH2～5的Gly-HCl缓冲液或者0.01M～1 M的pH2～5的柠檬酸盐缓冲液，或者0.1M～10M的尿素；

所述再生缓冲液是0.01M～1M的pH2～5的Gly-HCl缓冲液或者0.01M～1 M的pH2～5的柠檬酸盐缓冲液，或者0.1M～10M的尿素； 

所述保存缓冲液是上述偶联缓冲液或者是上述偶联缓冲液与防腐剂和 保护剂的混合溶液，所述防腐剂是0.01～0.1%的叠氮钠或者0.01～0. 1%的硫柳汞，所述保护剂是0.05～1%BSA或者0.05～1%的动物血清或者 0.05%～1%的蛋白酶抑制剂。