[发明专利]新猪环病毒、疫苗及诊断试剂

说明书

本申请是申请号为98810652.3、申请日为1998年10月1日、发明名称为“新猪环病毒、疫苗及诊断试剂”的发明专利申请的分案申请。

本发明涉及一种引起PMWS综合症(猪多系统性消瘦综合症，也称为断乳后多系统性消瘦综合症)的新型猪环病毒株(porcinecircovirus简称为PCV)，涉及检测其的试剂和方法，涉及免疫接种方法及疫苗，和涉及制备这些试剂和疫苗的方法。

最初，在猪肾细胞系PK/15中检测到PCV为非细胞致病性污染物。此病毒与幼禽贫血病毒(简称为CAV)和PBFDV病毒(PscittacineBeakandfeatherdiseaseVirus)被分类为环病毒科(Circocuridae)。此病毒为小型无被膜病毒(从15-24nm)，共同特征为含有1.76-2.31kb的环状单链DNA形式的基因组。最初认为该基因组编码一种约30kDa的多肽(Todd等人，病毒学文献(ArchVirol)，1991，117；129-135)。然而，最近的工作显示其更为复杂的转录(MeehanB.M.等人，1997，78：221-227)。此外，在三种类型已知环病毒之间的核苷酸序列或共同抗原决定簇中无明显同源性。

一直认为来源于PK/15细胞的PCV无致病性。其序列由MeehanB.M.等人，普通病毒学杂志(J.Gen.Virol.)，1997，78：221-227可知。直到最近有人意识到PCV株可能为致病性的，与PMWS综合症相关(GupiP.S.Nayar等人，加拿大兽医杂志(Can.Vet.J.)，1997，38：385-387；ClarkE.G.，美国猪应用协会进展(Proc.Am.Assoc.SwinePrac.)，1997；499-501)。Nayar等人利用PCR技术从患有PMWS综合症的猪中检测到PCVDNA。此前，尚未有野生型PCV毒株被分离和纯化。

在加拿大、美国和法国检出的PMWS综合症临床上的特征为体重逐渐下降，出现诸如呼吸急促、呼吸困难和黄疸的临床表现。从病理学角度而言，这些症状是淋巴细胞或肉芽肿浸润、淋巴结病的临床表现，和更罕见的肝炎、淋巴细胞性或肉芽肿性肾炎(ClarkE.G.，美国猪应用协会进展1997；499-501；LaSemaineVeterinaireNo.26，LaSemaineVeterinaire增刊，1996(834)；LaSemaineVeterinaire1997(857)：54；GupiP.S.Nayar等人，加拿大兽医杂志，1997，38：385-387)。

本申请人从肺或神经节样本中成功分离了五种新PCV毒株，此后称为根据本发明的环病毒，其中这些样本获自位于加拿大、美国(加利福尼亚)和法国(Brittany)的农场。已经从患有PMWS综合症的猪的损伤处检出这些病毒，而在健康猪中未检出。

此外，本申请人测定了这些毒株中的4株之基因组序列，即从加拿大、美国获得的毒株以及从法国获得的两株毒株。在核苷酸水平上这些毒株相互之间显示出强烈的同源性，超过96％；而与PK/15毒株之间同源性较低，约76％。因此，认为新毒株为一种新型猪环病毒的代表，此处称为II型，I型由PK/15代表。

因此，本发明的主题为分离的或纯化制品形式的如上述的II型猪环病毒。

本发明涉及可从患有PMWS综合症病猪中的生理学样本或组织，尤其是损伤组织样本中分离的，尤其是依照实施例所述的方法分离的任何猪环病毒，特别是涉及II型环病毒。

本发明的主题更具体的是五种毒株的纯化制品，其已保藏在ECACC(欧洲动物细胞保藏中心，应用微生物及研究中心，PortonDown，Salisbury，WiltshireSP40JG，英国)：

保藏号V97100219(此处称为Imp.1008PCV)；

保藏号V97100218(此处称为Imp.1010PCV)；

保藏号V97100217(此处称为Imp.999PCV)；于1997年10月2日(星期四)保藏，以及

保藏号V98011608(此处称为Imp.1011-48285)；

保藏号V98011609(此处称为Imp.1011-48121)；于1998年1月16日(星期五)保藏。

本发明涉及从患病猪分离的猪环病毒，和/或与本发明毒株具有显著血清学相似性的环病毒，和/或在严格条件下可与本发明的毒株交叉杂交的环病毒，所述严格条件是指例如不能与PCVPK/15毒株杂交。