[发明专利]一种同时检测三类镰刀菌毒素的快速分子检测方法与应用

权利要求书

1.用于检测三类镰刀菌毒素的特异性引物四条，primer A/B和primier E/F，其引物序列为：

Primer A：5’-CTTGTCAGGCGGCACAGTAG-3’

Primer B：5’-AAGTATGGTCCAGTTGTCCGTATT-3’

Primer C：5’-GCAAGTCTGGCGAGGCC-3’

Primer D：5’-TCAAAGGCCAGAGCAACCC-3’

其中primer A/D引物对在产生雪腐镰刀菌烯醇(NIV)毒素的镰刀菌中特异性扩增出643bp的产物，primer B/D引物对产生15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇(15ADON)毒素的镰刀菌中特异性扩增出424bp的产物，primer C/D引物对产生3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3ADON)毒素的镰刀菌中特异性扩增出342bp的产物。

2.一种同时检测三类镰刀菌毒素的快速分子检测方法，其步骤包括：

1)从被测生物材料中抽提DNA，得到DNA样品；

2)用权利要求1中的所示的引物对步骤1)中的DNA样品进行PCR扩增，得到权利要求1中的特异性大小的DNA片段。

3)用步骤2)的到的DNA片段，检测所述生物材料重视否存在所述的毒素3ADON和/或15ADON和/或NIV。

3.根据权利要求2所述镰刀菌毒素特异性检测方法，其中的PCR步骤包括：

1)扩增反应体系：在20μl反应液中，包含50ng模板DNA，0.3μM primerA，0.1μM primerB，0.15μM primer C和0.3μM primer D，10μl 2×TaqMix(包含0.1U Taq Polymerase/μl，500μM dNTP，20mM Tris-HCl，100mM KCl，3mM MgCl₂)。

2)PCR扩增程序为：94℃预变性3min，94℃变性40min，69℃退火1min，72℃延伸1min，30个循环，最后72℃延伸10min。

3)电泳检测：反应完成后，取7μl PCR产物在1.5％琼脂糖凝胶上电泳，凝胶成像系统中紫外灯下照相，根据扩增产物大小判定结果。

4.一种同时检测三类镰刀菌毒素的快速分子检测方法在检测镰刀菌毒素中的应用。

5.一种同时检测三类镰刀菌毒素的快速分子检测方法在检测籽粒，饲料或食品安全中镰刀菌毒素的应用。