[发明专利]用于从生物材料中提取和检测脂溶性组分的方法

说明书

本发明涉及分析来自生物材料(尤其是富含脂质的食品)的脂溶性组分(尤其是染料)、富集所述组分并随后分析的方法。所述方法包括提取和分离步骤和随后的分析步骤的组合。

本发明还涉及用于进行所述方法的分析试剂盒和分析设备。

根据本发明的方法由多个步骤组成。是关键性的并且表征本发明的必需步骤为：

1.预处理样品，去除脂质。

2.通过特定的溶剂或溶剂混合物将染料提取进提取混合物中。

3.在最终通过眼睛或光学增强设备检测和定量之前，破坏对氧化敏感的成分例如类胡萝卜素。

本发明的前景是溶解脂溶性组分和生物基质之间的复杂复合物，提供测定食物和饲料中的物质(在本文下文中也称作组分)的方法的分析试剂盒和用途。

对本发明的检测方法而言，所考虑的脂溶性组分为染料。天然和合成的染料被用于对不同应用的制品进行。它们的作用是给予某些光学品质特性。可以被染色的生物材料是蛋黄和蛋制品、鱼和鱼制品、水果和蔬菜汁和/或制剂，以及黄油或其他乳制品。用于人消耗的生物材料的染色可以通过饲料引入或在加工中引入。

对食物和饲料安全性以及对检测有毒物质或伪造物质的提高的要求(特别是在国际商品贸易中)需要快速、灵敏和可靠的分析，优选地尽可能接近所述制品。因此，需要由尽可能少的工作步骤组成和/或具有很低的技术复杂性的方法。在这种情况下，期望使用下述方法，所述方法可以在一次性分析试剂盒的基础上应用。

在本文上下文中，提供了例如对用苏丹红或其他染料伪造食物和饲料颜色的检测。

分析生物材料的现代方法通常包括生物材料成分(constituent)以及组分(component)的分离(separation)、提取、离析(isolation)和/或富集。这些方法步骤在用于分离干扰或伪造结果的物质的定性和定量分析中均是不可或缺的。

WO 2008/031874公开了分析生物材料成分(尤其是类胡萝卜素和维生素)的方法，其特征是用至少一种提取所述成分的有机溶剂处理生物材料，然后通过分光光度计分析测量所提取的溶液。

从WO 2008/031874开始，本发明的目的是提供用于从富含脂质的生物材料中提取天然和合成染料(特别是苏丹染料)的方法，所述方法的选择性足以将物质以相当小的复杂性从生物材料(例如络合的固体基质)中溶解，并且需要时能够借助于一次性分析试剂盒简单和快速地应用。

权利要求1中要求保护的方法、权利要求12中要求保护的用途和权利要求13中要求保护的分析试剂盒实现了该目的。

优选的实施方案描述于从属权利要求中。所有权利要求的措辞通过引用并入本说明书中。

根据本发明，预处理、提取和任何随后的分离以下述方式组合，所述方式使得可以检测非常小量的染料。

在本发明的上下文中，“生物材料”表示从植物或动物获得的富含脂质的食物和饲料，例如蛋、黄油、全脂奶、奶酪、香肠、油。

在所述方法的一个优选的实施方案中，在使用生物材料之前对其进行机械粉碎和纯化的过程。

更有利的是通过振动手工进行提取，尤其是小心地振动以避免溶血。

根据本发明必须被解决的问题如下：

首先，使用WO 2008/031874中所述方法，生物材料的脂质(脂肪)会与染料一起被提取进有机相中。该脂肪提取会破坏分离，并且检测极限会显著提高。因此，脂肪的提取应当被减少或者尽可能完全。

一种可能的解决方案可以是寻找特定的水缓冲液/有机溶剂组合，所述组合允许选择性提取染料而不提取脂肪。这种方式的实验产生分离溶剂体系，允许选择性提取苏丹(I、II、III、IV)和一些类胡萝卜素，但是几乎不提取脂肪。这类体系的缺点是低提取效率(5％-10％)，这导致测定的不稳定和样品体积的增加。

另一种可能的解决方法可能是在提取前对富含脂肪的材料(例如蛋黄)进行化学处理，从而将脂肪转化为不可提取的形式或者将其破坏。例如，用水/醇KOH处理会将脂肪转化为脂肪酸的钾盐和甘油。该溶液的缺点是：使用对使用者不友好并有腐蚀性的强碱溶剂，并且在处理期间需将混合物振动和加热若干小时。

根据本发明，申请人描述了在提取前使用至少一种脂酶来酶促消化脂肪，这会导致与化学处理相同的结果，但是条件温和安全，并且更快速。

在本发明的上下文中，脂酶是一种酶，其催化来自生物材料的油和脂肪中存在的甘油三酯底物中的酯键水解，产生甘油单酯和甘油二酯和游离脂肪酸。本发明的脂酶可进一步能够以高底物特异性降解富含C₈到C₁₈脂肪酸的膳食脂质(例如甘油三酯、脂肪、油)。