[发明专利]一种检测阴道分泌物中细菌菌群的试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测微生物的试剂盒及其制备方法，具体地说， 涉及一种检测阴道分泌物中需氧菌/厌氧菌和兼性厌氧菌的试剂盒及 其制备方法。

背景技术

近来研究发现，女性细菌性阴道感染可分为两种，一种是由厌氧 菌和兼性厌氧菌引起的，临床上称细菌性阴道病BV，另一种是由需 氧菌引起的，临床上称需氧菌阴道炎AV。两种阴道炎的病原体不同， 临床症状和治疗方案也不相同，区别这两种阴道感染，在细菌性阴道 感染检测中具有重要的意义。

临床上主要根据微生物学检验和临床表现来鉴定阴道感染，其中 将微生物学检验结果作为确诊的依据。

BV的诊断金标准仍为1983年制定的Amsel方法，我国将唾液酸苷 酶也纳入了BV的诊断标准。由于Amsel需做四项检测，特别是湿片镜 检寻找线索细胞十分费时，不便于临床常规，特别是医院门诊等的使 用。在我国主要采用单项唾液酸苷酶检测BV，但由于许多细菌和真 菌均可以产生唾液酸苷酶，因此，单独使用唾液酸苷酶诊断BV时， 易造成误诊。

AV的诊断主要采用Gilbert提出的，经Tempera修改的综合诊断方 法，其诊断标准为：①异常阴道黄色分泌物；②阴道PH升高＞5.0； ③分泌物有异味，KOH试验阴性；④阴道分泌物高倍镜检发现大量白 细胞；⑤Donder AV评分＞1分。其中，AV评分为必备指标，但AV评 分十分复杂，需综合阴道分泌物中乳酸杆菌分级、白细胞数量以及中 毒白细胞所占比例、背景菌落数等指标，不适于在临床常规，特别是 医院门诊等的使用。

发明内容

本发明的目的是提供一种阴道分泌物中需氧菌/厌氧菌和兼性厌 氧菌的AV/BV联合检测试剂盒。

本发明的另一目的是提供所述试剂盒的制备方法。

为了实现本发明目的，本发明的一种检测阴道分泌物中细菌菌群 的试剂盒，包括：1)反应装置：所述反应装置具有过氧化氢反应孔、 唾液酸苷酶反应孔、白细胞酯酶反应孔、β-葡萄糖醛酸酶反应孔和凝 固酶反应孔；2)一种或多种显色剂。

前述的试剂盒，其还包括样品稀释液。

前述的试剂盒，所述反应装置的过氧化氢反应孔包被有辣根过氧 化物酶和二乙氨基对苯二胺。

前述的试剂盒，所述反应装置的唾液酸苷酶反应孔包被有5-溴-4- 氯-3-吲哚-N-乙酰神经氨酸盐，其对应的显色剂A为固紫B或固红TR。

前述的试剂盒，所述反应装置的白细胞酯酶反应孔包被有5-溴-4- 氯-3-吲哚-乙酸盐。

前述的试剂盒，所述反应装置的β-葡萄糖醛酸酶反应孔包被有5- 溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸盐。

前述的试剂盒，所述反应装置的凝固酶反应孔包被有甘氨酰精氨 酸β萘胺，其对应的显色剂B为固蓝B、固红B、固蓝BB或固蓝RR，优 选固蓝B。

前述的试剂盒，所述样品稀释液中含有Triton×100和树胶。

前述的试剂盒，所述反应装置按如下方法制备获得：

1)反应基板的制备：

反应基板由ABS工程塑料制成，其上有5个Φ4mm的圆孔，分别 为过氧化氢反应孔、唾液酸苷酶反应孔、白细胞酯酶反应孔、β-葡萄 糖醛酸酶反应孔和凝固酶反应孔，在每个反应孔中填入下述相应的反 应垫；

2)过氧化氢反应垫的制备：

溶液A：二乙氨基对苯二胺10mg

α-萘酚20mg

无水乙醇10ml

溶液B：辣根过氧化物酶10000单位

失活纯化的牛血清白蛋白1g

Tris-HCl 200mmol/L pH7.0 10ml

将溶液A 1μl滴加在Φ4mm层析纸垫上，避光条件下，25℃流动 空气干燥1小时后，在纸垫上滴加溶液B 1μl，避光条件下，25℃流动 空气干燥4小时，密封保存在2-8℃；

3)唾液酸苷酶反应垫的制备：

底物溶液：5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙酰神经氨酸盐0.05g

乙酸盐溶液200mmol/L pH5.510ml，其中含NaCl 0.2mol/L

将底物溶液1μl滴加在Φ4mm层析纸垫上，避光条件下，25℃流 动空气干燥4小时，密封保存在2-8℃；

4)白细胞酯酶反应垫的制备：