[发明专利]一种检测阴道分泌物中细菌菌群的试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种检测阴道分泌物中细菌菌群的试剂盒，其包括：

1)反应装置

所述反应装置具有过氧化氢反应孔、唾液酸苷酶反应孔、白细胞 酯酶反应孔、β-葡萄糖醛酸酶反应孔和凝固酶反应孔；

2)一种或多种显色剂；

3)样品稀释液；

其中，所述反应装置的过氧化氢反应孔包被有辣根过氧化物酶和 二乙氨基对苯二胺；

所述反应装置的唾液酸苷酶反应孔包被有5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙 酰神经氨酸盐，其对应的显色剂A为固紫B或固红TR；

所述反应装置的白细胞酯酶反应孔包被有5-溴-4-氯-3-吲哚-乙酸 盐；

所述反应装置的β-葡萄糖醛酸酶反应孔包被有5-溴-4-氯-3-吲哚 -β-葡萄糖醛酸盐；

所述反应装置的凝固酶反应孔包被有甘氨酰精氨酸β萘胺，其对 应的显色剂B为固蓝B、固红B、固蓝BB或固蓝RR；

所述样品稀释液中含有Triton×100和树胶。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述反应装置按如 下方法制备获得：

1)反应基板的制备：

反应基板由ABS工程塑料制成，其上有5个Φ4mm的圆孔，分别 为过氧化氢反应孔、唾液酸苷酶反应孔、白细胞酯酶反应孔、β-葡萄 糖醛酸酶反应孔和凝固酶反应孔，在每个反应孔中填入下述相应的反 应垫；

2)过氧化氢反应垫的制备：

溶液A：二乙氨基对苯二胺10mg

α-萘酚20mg

无水乙醇10ml

溶液B：辣根过氧化物酶10000单位

失活纯化的牛血清白蛋白1g

Tris-HCl 200mmol/L pH7.010ml

将溶液A 1μl滴加在Φ4mm层析纸垫上，避光条件下，25℃流动 空气干燥1小时后，在纸垫上滴加溶液B 1μl，避光条件下，25℃流动 空气干燥4小时，密封保存在2-8℃；

3)唾液酸苷酶反应垫的制备：

底物溶液：5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙酰神经氨酸盐0.05g

乙酸盐溶液200mmol/L pH5.510ml，其中含NaCl 0.2mol/L

将底物溶液1μl滴加在Φ4mm层析纸垫上，避光条件下，25℃流 动空气干燥4小时，密封保存在2-8℃；

4)白细胞酯酶反应垫的制备：

底物溶液：5-溴-4-氯-3-吲哚-乙酸盐0.05g

磷酸盐缓冲液200mmol/LpH7.010ml，其中含硫酸钠2wt％

将底物溶液1μl滴加在Φ4mm层析纸垫上，避光条件下，25℃流 动空气干燥4小时，密封保存在2-8℃；

5)β-葡萄糖醛酸酶反应垫的制备：

底物溶液：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸盐0.05g

磷酸盐缓冲液200mmol/LpH7.010ml，其中含乙二醇50mmol/L

将底物溶液1μl滴加在Φ4mm层析纸垫上，避光条件下，25℃流动 空气干燥4小时，密封保存在2-8℃；

6)凝固酶反应垫的制备：

底物溶液：甘氨酰精氨酸β萘胺0.05g

Tris-HCl 200mmol/L pH 8.510ml

将底物溶液1μl滴加在Φ4mm层析纸垫上，避光条件下，25℃流动 空气干燥4小时，密封保存在2-8℃；

将2)～6)制备的反应垫填入相应的反应孔中，用冲压机压实， 在孔上粘贴铝箔保护膜，装入铝箔袋中，即得反应装置。

3制备权利要求1或2所述试剂盒的方法，其包括如下步骤：

1)反应基板的制备：

反应基板由ABS工程塑料制成，其上有5个Φ4mm的圆孔，分别 为过氧化氢反应孔、唾液酸苷酶反应孔、白细胞酯酶反应孔、β-葡萄 糖醛酸酶反应孔和凝固酶反应孔，在每个反应孔中填入下述相应的反 应垫；

2)过氧化氢反应垫的制备：

溶液A：二乙氨基对苯二胺10mg

α-萘酚20mg

无水乙醇10ml

溶液B：辣根过氧化物酶10000单位

失活纯化的牛血清白蛋白1g

Tris-HCl 200mmol/L pH7.010ml

将溶液A 1μl滴加在Φ4mm层析纸垫上，避光条件下，25℃流动 空气干燥1小时后，在纸垫上滴加溶液B 1μl，避光条件下，25℃流动 空气干燥4小时，密封保存在2-8℃；

3)唾液酸苷酶反应垫的制备：

底物溶液：5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙酰神经氨酸盐0.05g

乙酸盐溶液200mmol/L pH5.510ml，其中含NaCl 0.2mol/L

将底物溶液1μl滴加在Φ4mm层析纸垫上，避光条件下，25℃流 动空气干燥4小时，密封保存在2-8℃；

4)白细胞酯酶反应垫的制备：

底物溶液：5-溴-4-氯-3-吲哚-乙酸盐0.05g

磷酸盐缓冲液200mmol/L pH7.010ml，其中含硫酸钠 2wt％

将底物溶液1μl滴加在Φ4mm层析纸垫上，避光条件下，25℃流 动空气干燥4小时，密封保存在2-8℃；

5)β-葡萄糖醛酸酶反应垫的制备：

底物溶液：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸盐0.05g

磷酸盐缓冲液200mmol/LpH7.010ml，其中含乙二醇50mmol/L

将底物溶液1μl滴加在Φ4mm层析纸垫上，避光条件下，25℃流动 空气干燥4小时，密封保存在2-8℃；

6)凝固酶反应垫的制备：

底物溶液：甘氨酰精氨酸β萘胺0.05g

Tris-HCl 200mmol/L pH 8.510ml

将底物溶液1μl滴加在Φ4mm层析纸垫上，避光条件下，25℃流动 空气干燥4小时，密封保存在2-8℃；

7)将2)～6)制备的反应垫填入相应的反应孔中，用冲压机压实， 在孔上粘贴铝箔保护膜，装入铝箔袋中，即得反应装置；

8)样品稀释液的制备：

9)显色剂A的制备：

充分混匀，分装在深色瓶中；

10)显色剂B的制备：

充分混匀，分装在深色瓶中。