[发明专利]一种氨基化合物高效液相色谱柱前衍生化试剂及其检测方法

权利要求书

1.一种氨基化合物分析检测用柱前衍生化试剂的高效液相色谱检测方法，其特 征在于，以氨基衍生化试剂3，5-二硝基-4-氯-三氟甲基苯与氨基化合物进行衍生 化反应，然后通过高效液相色谱进行分离检测，其步骤如下：

确立氨基化合物与3，5-二硝基-4-氯-三氟甲基苯进行衍生化反应条件，其衍 生化反应条件包括：反应物摩尔比、控制反应温度、控制反应时间、pH值，所 述反应物摩尔比为1∶1-8.0，所述控制反应温度为40-80℃，所述控制反应时间 为30-80min，所述pH值为7.5-10.0；

建立衍生产物HPLC分离检测方法，所述衍生产物HPLC分离检测方法包 括高效液相色谱柱的选择、流动相的选择、流动相的梯度设定、流动相的流速、 检测波长及时间、建立检测标准曲线，其中，所述高效液相色谱柱为普通反相 C18色谱柱；所述流动相有机相为甲醇、乙腈的一种或两种混合，所述流动相水 相为纯水、乙酸-乙酸钠缓冲溶液，磷酸缓冲溶液或离子对溶液的一种，其pH 在3.0-10.0；所述流动相梯度根据氨基化合物不同，分别设定；流动相流速为 0.4-1.0ml/min；所述检测波长在230-360nm，所述检测时间为5-60min；

氨基化合物样品的前处理，所述前处理包括动植物蛋白质的酸解而释放游离 氨基化合物；氨基化合物的萃取，其中所述蛋白质酸解包括6.0mol/L浓盐酸在 120-150℃水解；

氨基化合物样品的衍生化反应；

氨基化合物样品的HPLC检测；

所述氨基化合物衍生化反应的方程式如下：

其中R₁、R₂为不同的取代基，包括：氢、烃基、羧基、羟基、硝基、三唑环取 代基。

2.根据权利要求1所述的一种氨基化合物分析检测用柱前衍生化试剂的高效液 相色谱检测方法，所述摩尔比为1∶3-5；所述控制反应温度为50-60℃；所述衍 生化反应条件中的pH为9.0-9.5；所述控制反应时间为30-40min。