[发明专利]一种酶联免疫试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种酶联免疫试剂盒及其应用。

背景技术

三聚氰胺(Melamine)，分子式C₃N₆H₆，简称三胺，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物。三聚氰胺呈弱碱性，与盐酸、硫酸、硝酸、乙酸、草酸等都能形成三聚氰胺盐。三聚氰胺是重要的氮杂环有机化工原料，在中性或微碱性情况下，与甲醛缩合而成各种羟甲基三聚氰胺，但在微酸性环境中(pH5.5～6.5)与羟甲基的衍生物进行缩聚反应而生成树脂产物。三聚氰胺是一种用途广泛的基本有机化工中间产品，最主要的用途是作为生产三聚氰胺甲醛树脂的原料。该树脂硬度比脲醛树脂高，不易燃，耐水、耐热、耐老化、耐电弧、耐化学腐蚀，有良好的绝缘性能、光泽度和机械强度，广泛运用于木材、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革、电气、医药等行业。三聚氰胺还可以作阻燃剂、减水剂、甲醛清洁剂等。

虽然，目前广泛认为三聚氰胺毒性比较低微，大鼠口服的半数致死量大于3g/kg体重，但长期摄入仍不容忽视，会造成生殖、泌尿系统的损害，膀胱、肾部结石，并可进一步诱发膀胱癌。1994年国际化学品安全规划署和欧洲联盟委员会合编的《国际化学品安全手册》第三卷和国际化学品安全卡片说明：长期或反复大量摄入三聚氰胺可能对肾与膀胱产生影响，导致产生结石。

蛋白质主要由氨基酸组成，其含氮量一般不超过30％，而三聚氰胺分子中含氮量为66％左右。常用的蛋白质测试方法“凯氏定氮法”是通过测出含氮量乘以6.25来估算蛋白质含量，因此，添加三聚氰胺会使得食品的蛋白质测试含量虚高，从而使劣质食品和饲料在检验机构只做粗蛋白质简易测试时蒙混过关。食品和饲料工业蛋白质含量测试方法的缺陷，加之三聚氰胺作为一种白色结晶粉末，没有什么气味和味道，食品与饲料中掺杂了三聚氰胺后也不易被发现，为此三聚氰胺也常被不法商人用作食品添加剂，以提升食品检测中的蛋白质含量指标，因此三聚氰胺也被人们称为“蛋白精”。因此，需要灵敏、准确、快速的检测方法。

目前检测三聚氰胺含量的化学方法有高效液相色谱法和液相色谱-串联质谱法，由于复杂的仪器设备和繁琐的过程，不适合现场监控和大量样本筛查。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种三聚氰胺单克隆抗体。

本发明所提供的三聚氰胺单克隆抗体，是由保藏编号为CGMCC No.3394的三聚氰胺单克隆抗体杂交瘤细胞株MAL分泌产生的。

保藏编号为CGMCC No.3394的三聚氰胺单克隆抗体杂交瘤细胞株MAL也属于本发明的保护范围。

所述三聚氰胺单克隆抗体在制备检测三聚氰胺的酶联免疫试剂盒中的应用也属于本发明的保护范围。

本发明的另一个目的是提供一种酶联免疫试剂盒。

本发明所提供的酶联免疫试剂盒，为下述1)、2)、3)或4)中任一所述酶联免疫试剂盒：

1)酶联免疫试剂盒中包括三聚氰胺半抗原与载体蛋白的偶联物、所述三聚氰胺单克隆抗体和酶标记抗抗体；其中，所述偶联物作为包被原；

2)酶联免疫试剂盒中包括三聚氰胺半抗原的酶标记物、所述三聚氰胺单克隆抗体和抗抗体；其中，所述抗抗体作为包被原；

3)酶联免疫试剂盒中包括三聚氰胺半抗原的酶标记物、所述三聚氰胺单克隆抗体；其中，所述三聚氰胺单克隆抗体作为包被原；

4)酶联免疫试剂盒中包括三聚氰胺半抗原与载体蛋白的偶联物、所述三聚氰胺单克隆抗体的酶标记物；其中，所述偶联物作为包被原；

所述三聚氰胺半抗原的结构式如式I所示：

(式I)。

所述酶联免疫试剂盒还可包括三聚氰胺标准品溶液、底物显色液、洗涤液、样品稀释液；

所述三聚氰胺标准品溶液为浓度分别为0μg/L、5μg/L、20μg/L、100μg/L、500μg/L和2500μg/L的三聚氰胺标准品溶液；

上述任一所述本发明所提供的试剂盒中还可包括底物显色液；所述底物显色液由A液和B液组成，A液为浓度为1.5％-2.5％的过氧化脲的水溶液，B液为浓度为0.5％-1.5％的四甲基联苯胺的水溶液。

其中，所述A液优选为浓度为2％的过氧化脲的水溶液，B液优选为浓度为1％的四甲基联苯胺的水溶液。

上述任一所述本发明所提供的试剂盒中还可包括洗涤液；所述洗涤液为浓度为0.8％～1.2％的吐温20和浓度为0.3％-0.7％的叠氮化钠的0.005M-0.015M磷酸盐缓冲液。

其中，所述洗涤液优选为浓度为1％的吐温20和浓度为0.5％的叠氮化钠的0.01M磷酸盐缓冲液。