[发明专利]一种酶联免疫试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种三聚氰胺单克隆抗体，是由保藏编号为CGMCC No.3394的三聚氰胺单克隆抗体杂交瘤细胞株MAL分泌产生的。

2.保藏编号为CGMCC No.3394的三聚氰胺单克隆抗体杂交瘤细胞株MAL。

3.权利要求1中所述三聚氰胺单克隆抗体在制备检测三聚氰胺的酶联免疫试剂盒中的应用。

4.一种酶联免疫试剂盒，为下述1)、2)、3)或4)中任一所述酶联免疫试剂盒：

1)酶联免疫试剂盒中包括三聚氰胺半抗原与载体蛋白的偶联物、权利要求1中所述三聚氰胺单克隆抗体和酶标记抗抗体；其中，所述偶联物作为包被原；

2)酶联免疫试剂盒中包括三聚氰胺半抗原的酶标记物、权利要求1中所述三聚氰胺单克隆抗体和抗抗体；其中，所述抗抗体作为包被原；

3)酶联免疫试剂盒中包括三聚氰胺半抗原的酶标记物、权利要求1中所述三聚氰胺单克隆抗体；其中，所述三聚氰胺单克隆抗体作为包被原；

4)酶联免疫试剂盒中包括三聚氰胺半抗原与载体蛋白的偶联物、权利要求1中所述三聚氰胺单克隆抗体的酶标记物；其中，所述偶联物作为包被原；

所述三聚氰胺半抗原的结构式如式I所示：

5.根据权利要求4所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述酶联免疫试剂盒包括三聚氰胺标准品溶液、底物显色液、洗涤液、样品稀释液；

所述三聚氰胺标准品溶液为浓度分别为0μg/L、5μg/L、20μg/L、100μg/L、500μg/L和2500μg/L的三聚氰胺标准品溶液；

所述底物显色液由A液和B液组成，A液为浓度为1.5％-2.5％的过氧化脲的水溶液，B液为浓度为0.5％-1.5％的四甲基联苯胺的水溶液；

所述洗涤液为浓度为0.8％～1.2％的吐温20和浓度为0.3％-0.7％的叠氮化钠的0.005M-0.015M磷酸盐缓冲液；

所述样品稀释液为20×(0.03mol/L-0.05mol/L)的磷酸盐缓冲液。

6.根据权利要求4或5所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述抗抗体为羊抗鼠抗抗体或羊抗兔抗抗体。

7.根据权利要求4-6中任一所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述载体蛋白为牛血清白蛋白、人血清白蛋白、鼠血清蛋白、甲状腺蛋白、兔血清蛋白、血蓝蛋白或卵清白蛋白。

8.一种检测样品中三聚氰胺的方法，包括如下步骤：

1)将待测样品进行前处理，得到待测样本溶液；

2)用权利要求4-7中任一所述酶联免疫试剂盒对所述待测样本溶液进行检测；

所述前处理的方法为下述a)、b)、c)、d)、e)和f)中的任一：

a)所述待测样品为奶粉；每取0.8g-1.2g所述奶粉溶于8ml-12ml权利要求5中所述样品稀释液中，混合均匀，离心，取上清液，即为待测样本溶液；

b)所述待测样品为牛奶；将所述牛奶与权利要求5中所述样品稀释液按照1：(9-11)的体积比混匀，得到的溶液即为待测样本溶液；

c)所述待测样品为蛋；将每0.8g-1.2g蛋用8ml-12ml提取剂进行提取，得到的提取液即为待测样本溶液；

d)所述待测样品为宠物食品；将每1.8g-2.2g宠物食品用8ml-12ml提取剂进行提取，得到的提取液即为待测样本溶液；

e)所述待测样品为饲料；将每0.8g-1.2g饲料用8ml-12ml提取剂进行提取，得到的提取液即为待测样本溶液；

f)所述待测样品为小麦面筋；将每0.1g-0.3g小麦面筋用8ml-12ml提取剂进行提取，得到的提取液即为待测样本溶液；

所述提取剂的组成为：由Na₂HPO₄·12H₂O、NaH₂PO₄·2H₂O、NaCl、Tween20和水组成，所述Na₂HPO₄·12H₂O在所述提取剂中的浓度为2.9g/L，所述NaH₂PO₄·2H₂O在所述提取剂中的浓度为0.2g/L，所述NaCl在所述提取剂中的浓度为0.9g/L，所述Tween20在所述提取剂中的浓度为0.05g/L。