[发明专利]量子点荧光检测酶活性的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物检测领域，特别是涉及一种量子点荧光检测酶活性的方法。

背景技术

疾病早期快速检测是许多重大疾病治疗的关键，越早做出正确诊断越有利于疾病的治愈，因而发展早期检测技术得到医疗界的普遍重视，进而疾病检测与监测设备的家庭化成为医药发展的重要趋势之一。在最新的早期诊断方法中，疾病标志物的检测是研究的热点。以癌症为例，从上世纪70年代末，Leon和Shapiro等首次证实肿瘤患者外周血循环中存在较高水平的DNA，且肿瘤转移者其水平有进一步增高趋势以来，对癌症标志物的发现与检测研究就有了长足的发展。目前已知的癌症标志物包括酶类、激素类、胚胎抗原、糖蛋白类抗原、蛋白类和基因标志等等，其检测手段也多种多样。其中大部分研究是针对抗原、蛋白和基因类标志物，而对于酶类这一重要标志物的研究较少。

在癌症标志物中，各种酶蛋白其实占据了相当重要的位置。以γ-谷氨酰转移酶(GGT)、乳酸脱氢酶(LDH)和碱性磷酸酶(ALP)活性检测为例，这三种酶活性是血液化验中常有的指标，具有很重要的临床意义。比如：γ-谷氨酰转移酶的主要功能是参与体内蛋白质代谢，且广泛存在于人体各组织及器官中，以肾脏最为丰富，其次是胰肝等处。在胆汁淤积、炎症等刺激下肝合成GGT增加，因此大多数肝胆疾病血清GGT活动可有不同程度的增加。酒精性肝硬化及胆汁性肝硬化时，GGT明显升高，可达正常的5-10倍。重型肝炎、晚期肝硬化，由于微粒体破坏、酶合成减少，GGT因而下降。各种原因引起的肝内胆汁淤积、肝外胆道梗阻，GGT均明显增高，可达400国际单位/升以上。肝癌时，由于癌细胞逆分化，类似胚胎期，此酶的生成增加，故血清GGT也呈中度或高度升高，临床上也常把此酶作为观察慢性肝炎伴肝硬化病人是否转为肝癌的参考指标。乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶，乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内，其中以肾脏含量较高。急性心肌梗塞发作后，早期血清中乳酸脱氢酶(LDH)活性升高；肝炎、急性肝细胞损伤及骨骼肌损伤时LDH都会升高。患活动性风湿性心脏病、急性病毒性心肌炎、溶血性贫血、肾坏死等病LDH也可升高。碱性磷酸酶是一种磷酸单酯酶，广泛存在于人体组织和体液中，以骨、肝、乳腺、肠粘膜、肾，胎盘中。阻塞性黄疸、肝硬化、肝坏死，碱性磷酸酶明显升高(肝细胞性黄疸则升高不明显)；原发性和继发性肝癌时碱性磷酸酶亦明显升高，与癌组织中或癌肿周围肝细胞合成碱性磷酸酶增加有关；其他肿瘤如乳腺癌、肺癌、卵巢癌、骨细胞瘤、骨肉瘤等，碱性磷酸酶增高时，提示可能有肝脏转移。因此γ-谷氨酰转移酶(GGT)、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)的单一或联合检测可以实现癌症的早期诊断(S.L.Liang，D.W.Chan，Clinica Chimica Acta 2007，381，93-97)。

由于酶反应具有很强的专一性，酶蛋白往往较抗体、抗原或基因蛋白等更易于获得且生物活性相对稳定，酶反应的底物一般都是小分子的有机物，容易获得、价格便宜，所以构建酶类标志物的检测体系将更为方便和价廉，易于促进重大疾病早期诊断的普及化和家庭化，从而提高重大疾病的治愈率。