[发明专利]蚓激酶用于治疗颈动脉粥样硬化的应用

说明书

发明领域

本发明属于生物技术领域，具体地涉及蚓激酶用于制备治疗颈动脉粥样硬化药物的应用。 

发明背景 

动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是动脉壁变厚并失去弹性的几种疾病的统称，是动脉硬化中最常见而重要的类型。动脉粥样硬化的主要病变特征为动脉某些部位的内膜下脂质沉积，并伴有平滑肌细胞和纤维基质成分的增殖，逐步发展形成动脉粥样硬化性斑块(atheroscleroticplaque)。 

它是一种以中等和大动脉斑片状内膜下增厚(动脉粥样化)为特征的病变，可以减少或阻断血流，斑块部位的动脉壁增厚、变硬，斑块内部组织坏死后与沉积的脂质结合，形成粥样物质，称为粥样硬化。源于动脉粥样硬化的心脑血管疾病，是导致发病和死亡的主要因素。 

颈动脉作为脑动脉的上游血管，其硬化程度与脑血流供应直接相关。有报道^[1]证实：颈动脉斑块预测脑血管病变的敏感性为84％，特异性为79％。颈动脉粥样硬化引起脑梗死的机制有多种：(1)动脉粥样硬化斑块不稳定、破裂、脱落的小斑块栓塞远端血管；(2)动脉粥样硬化斑块表面粗糙，血小板和凝血因子被激活，形成血栓；(3)动脉粥样硬化斑块不断增大，导致颈动脉狭窄，使远端的灌注压下降，分水岭区供血不足，形成低灌注性脑梗死。 

蚓激酶是一种多组分酶制剂，其包含纤维蛋白溶酶(plasmin)和纤维蛋白溶酶原激活剂(plasminogen Activator)成分，具有直接溶解纤维蛋白和激活酶原间接溶解蛋白的作用。适用于治疗心、脑血管栓塞性疾病以及预防纤维蛋白原增高和血小板聚集率增高的疾病。临床试验证明，本药的胶囊剂对缺血性脑血管病、中风瘫痪肢体及语言障碍的恢复效果显著，是一种安全的纤溶药物。 

目前的基础研究已经证实纤维蛋白原及其降解产物参与了血栓形成和动脉粥样硬化的发展过程，流行病学研究证实纤维蛋白原是动脉粥样硬化的独立危险因素。近年来研究发现纤维蛋白原(Fg)及其降解产物(Fb和FDPs)可能是通过介导炎症反应，在AS发生发展中起了非常重要的作用。目前临床还未有从降低纤维蛋白原的角度对AS进行治疗的方法和药物应用。 

发明概述 

在一个方面中，本发明提供一种蚓激酶，所述蚓激酶是应用包括下列步骤的方法进行制备的： 

1)蚯蚓清洗：将活蚯蚓用水清洗后，加入白砂糖，或氯化钠，在室温下搅拌均匀，静置，剌激蚯蚓将其消化道内的分泌物吐尽，然后用温水将蚯蚓身上的糖或氯化钠及污物洗去； 

2)制浆：加入蚯蚓体积的1～8倍的水，将经步骤1)清洗过的蚯蚓进行细胞破碎，制成匀浆； 

3)除渣：除去步骤2)得到的匀浆中的粗渣； 

4)澄清：处理经步骤3)除渣后的匀浆液，得到澄清液； 

5)分离：采用阴离子交换层析柱或亲和层析柱分离步骤4)得到的蚯蚓澄清液，收集活性峰部分的层析流出液； 

6)浓缩脱盐：过滤步骤5)收集的层析液，滤除无机盐和小分子物质，脱去大部分水，得到除盐浓缩液； 

7)澄清过滤：滤除步骤6)得到的除盐浓缩液中的悬浮颗粒，得到澄清液； 

8)除菌：处理步骤7)的澄清液，除去菌体，达到药典质量标准。 

在一个实施方案中，所述制备蚓激酶的方法还包括： 

9)干燥：将步骤8)除菌后的澄清液进行干燥，得到蚓激酶干粉。 

在一个实施方案中，在步骤1)中将活露天红赤子爱胜蚓用水清洗后，按每公斤蚯蚓加入0.1～0.3公斤白砂糖，或0.2～0.4公斤氯化钠，在室温 下搅拌均匀，静置20～40分钟，剌激蚯蚓将其消化道内的分泌物吐尽，然后用30～50℃的温水将蚯蚓身上的糖或氯化钠及污物洗去。 

在一个实施方案中，在步骤2)中，用珠磨、胶体磨机或高压匀浆机将经步骤1)清洗过的蚯蚓进行细胞破碎，制成匀浆。 

在一个实施方案中，在步骤3)中，将步骤2)得到的匀浆用滤网孔径为5～20mm的不锈钢过滤器过滤，或使用离心机，除去匀浆中的粗渣。 

在一个实施方案中，在步骤4)中，经步骤3)除渣后的匀浆液，采用高速离心机或微孔膜过滤器处理，得到澄清液。 

在一个实施方案中，在步骤5)中，采用阴离子交换层析柱或亲和层析柱分离步骤4)得到的蚯蚓澄清液，用0.01～0.8M的醋酸盐洗脱，收集活性峰部分的层析流出液。