[发明专利]蚓激酶用于治疗颈动脉粥样硬化的应用

权利要求书

1.蚓激酶肠溶胶囊用于制备治疗颈动脉粥样硬化药物的应用，其中 剂量为60万单位/次，所述蚓激酶肠溶胶囊中的活性成分是用包括下列步 骤的方法制备的：

1)蚯蚓清洗：将活露天红赤子爱胜蚓用水清洗后，按每公斤蚯蚓加入 0.1～0.3公斤白砂糖，或0.2～0.4公斤氯化钠，在室温下搅拌均匀，静置 20～40分钟，刺激蚯蚓将其消化道内的分泌物吐尽，然后用30～50℃的 温水将蚯蚓身上的糖或氯化钠及污物洗去；

2)制浆：加入蚯蚓体积的1～8倍的水，用珠磨、胶体磨机或高压匀 浆机将经步骤1)清洗过的蚯蚓进行细胞破碎，制成匀浆；

3)除渣：将步骤2)得到的匀浆用滤网孔径为5～20mm的不锈钢过滤 器过滤，或使用离心机，除去匀浆中的粗渣；

4)澄清：经步骤3)除渣后的匀浆液，采用高速离心机或微孔膜过滤器 处理，得到澄清液；

5)分离：采用阴离子交换层析柱或亲和层析柱分离步骤4)得到的蚯蚓 澄清液，用0.01～0.8M的醋酸盐洗脱，收集活性峰部分的层析流出液；

6)浓缩脱盐：采用标准截流分子量为0.5～50K的平板膜、卷式膜或 中空纤维超滤装置过滤步骤5)收集的层析液，滤除无机盐和小分子物质， 脱去大部分水，得到除盐浓缩液；

7)澄清过滤：采用孔径为0.45～2μm的深层微孔膜或折叠式膜微孔膜 过滤装置，滤除步骤6)得到的除盐浓缩液中的悬浮颗粒，得到澄清液；

8)除菌：采用0.22μm的除菌滤膜过滤装置及辐照装置处理步骤7)的 澄清液，除去菌体，达到药典质量标准；

9)干燥：在无菌条件下将步骤8)除菌后的澄清液于-30～-40℃下冷冻 8～12小时；然后在0.2mmHg的真空度下，升温至25～30℃，干燥10 小时；继续升温至36～38℃，真空干燥14～15小时，得到蚓激酶干粉； 或是在无菌条件下将步骤8)除菌后的澄清液用泵打入喷雾干燥机内，经压 缩空气雾化后在150～250℃热风中脱水，得到蚓激酶干粉；

所述的活性成分包含下列组分：

①EFE-a：分子量为24663，N端序列为 Val Ile Gly Gly Thr Asn Ala Ser Pro Gly Glu Phe Pro Trp Gln Leu Gln，等电 点为3.46；

②EFE-b：分子量为29515，N端序列为Ile Val Gly Gly Ile Glu Ala Arg Pro Tyr Glu Phe Pro Pro Gln Val Ser Val Arg，等电点为3.50；

③EFE-c：分子量为29690，N端序列为 Ile Val Gly Gly Ile GluAlaArg Pro Tyr Glu Phe Pro Pro Gln Val Ser ValArg， 等电点为3.50；

④EFE-d：分子量为29595，N端序列为 Ile Val Gly Gly Ile Glu Ala Arg Pro Tyr Glu Phe Pro Pro Gln Val Ser Val Arg， 等电点为3.46；

⑤EFE-e：分子量为24201，N端序列为Ile Ile Gly Gly Ser Asn Ala Ser Pro Gly Glu Phe Pro Trp Gln Leu，等电点为3.68；

⑥EFE-f：分子量为24170，N  端序列为 Ile Ile Gly Gly Ser Asn Ala Ser Pro Gly Glu Phe Pro Trp Gln Leu，等电点为 3.62；和

⑦EFE-g：分子量为23028，N端序列为 Val Val Gly GlySerAsp Thr Thr Lys Gly Gln Tyr Pro，等电点为3.94。