[发明专利]一种小麦组织培养的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种小麦组织培养的方法。

背景技术

组织培养高频率再生是细胞工程育种、基因工程育种和功能基因组学研究的基 础，烟草、拟南芥等双子叶植物和水稻、短柄草等单子叶植物再生非常容易，因而 成为了基因工程研究的模式植物。相比之下，小麦组织培养还不稳定，在很大程度 上受外植体类型、生理状态、基因型和培养基等因素的限制，影响了基因工程育种 和功能基因组学研究的进程。目前为止，小麦组织培养成功的外植体包括幼胚、幼 穗、花药、成熟胚等，幼胚培养最为容易，花药培养和幼穗培养次之，成熟胚培养 最难。因此，幼胚一直被用作小麦组织培养和转基因研究的理想材料，愈伤组织诱 导率和植株再生率相对较高。小麦成熟胚培养取得了一定进展，并已成功用于农杆 菌转化和基因枪转化。无论是小麦哪种外植体的组织培养，常规方法是先将外植体 接种在含有2.0mg/l 2，4-D或Dicamba等生长素的培养基上黑暗条件下培养4周 左右诱导愈伤组织，然后转移到去掉2.0mg/l 2，4-D或Dicamba等生长素的培养 基上，光照条件下分化植株。利用这样的技术体系，不同小麦基因型在相同条件下 和同一小麦基因型在不同生理状态，培养效果差异显著，很多基因型不能成功再生 或再生率很低，不能满足基因工程研究的需要。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种小麦的组织培养方法。

本发明所提供的小麦组织培养方法，包括如下步骤：先将小麦胚诱导培养成胚 性愈伤组织；再将所述胚性愈伤组织分化培养成小麦再生植株；所述诱导培养的方 法包括如下步骤：将所述小麦胚依次用含有生长素的培养基进行诱导培养I、用不 含有生长素的培养基进行诱导培养II、再用含有生长素的培养基进行诱导培养III， 得到胚性愈伤组织。

上述过程中，所述小麦胚可为小麦幼胚。

当所述小麦胚为小麦幼胚时，所述含有生长素的培养基具体组成如下：由终浓 度为1650mg/L的NH₄NO₃、终浓度为1900mg/L的KNO₃、终浓度为440mg/L的 CaCl₂·2H₂O、终浓度为370mg/L的MgSO₄·7H₂O、终浓度为1700mg/L的KH₂PO₄、 终浓度为0.83mg/L的KI、终浓度为6.2mg/L的H₃BO₃、终浓度为22.3mg/L的 MnSO₄·4H₂O、终浓度为8.6mg/L的ZnSO₄·7H₂O、终浓度为0.25mg/L的 Na₂MoO₄·2H₂O、终浓度为0.025mg/L的CuSO₄·5H₂O、终浓度为0.025mg/L的 CoCl₂·6H₂O、终浓度为27.8mg/L的FeSO₄·7H₂O、终浓度为37.3mg/L的 Na₂-EDTA·2H₂O、终浓度为30g/L的蔗糖、终浓度为10mg/L的维生素B1、终浓度 为150mg/L的谷氨酰胺、终浓度为2.0mg/L的2，4-D、终浓度为2.4g/L的Phytagel (植物凝胶)组成；所述终浓度为各物质在所述含有生长素的培养基中的浓度。该 含有生长素的培养基的pH值具体可为6.0。

当所述小麦胚为小麦幼胚时，所述不含有生长素的培养基的组成为：除了不含 有2，4-D外，其余组成与上述含有生长素的培养基的组成相同。