[发明专利]基于新型DNA结合染料的实时荧光定量PCR检测方法及其应用

权利要求书

1.一种基于新型DNA结合染料的实时荧光定量PCR检测方法，是以SYTO为荧光染料进行的实时荧光定量PCR检测方法。

2.根据权利要求1所述的PCR检测方法，其特征在于：所述SYTO荧光染料为SYT082。

3.根据权利要求1所述的PCR检测方法，其特征在于：所述SYTO荧光染料的浓度为2μM。

4.根据权利要求1所述的PCR检测方法，其特征在于：所述PCR反应体系为：10×PCR缓冲液2.5μl，dNTP(2.5mM)2μl，MgCl₂(25mM)2μl，上游引物(10μM)0.5μl，下游引物(10μM)0.5μl，rTaq酶(5U/μl)0.125μl，模板DNA(含1.0×10¹～10⁹拷贝)1μl，染料1μl，加水补齐至终体积25μl。

5.根据权利要求1至4任一项所述的PCR检测方法，其特征在于：所述PCR反应条件为：预变性：94℃3min；扩增95℃30s，52℃30s，72℃30s，共40个循环；72℃10min。

6.根据权利要求4或5所述的PCR检测方法，其特征在于：所述检测方法包括以下步骤：

1)将SYTO为荧光染料加入权利要求4所述的PCR反应体系中；

2)按权利要求5所述的反应条件进行PCR反应。

7.一种实时荧光定量PCR检测试剂盒，包括10×PCR缓冲液2.5μl、dNTP(2.5mM)2μl、MgCl₂(25mM)2μl、rTaq酶(5U/μl)0.125μl和荧光染料，其特征在于，所述荧光染料为SYTO荧光染料。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：所述SYTO荧光染料为SYTO82。

9.根据权利要求7或8所述的试剂盒，其特征在于：所述SYTO荧光染料的浓度为2μM。

10.SYTO荧光染料作为实时荧光定量PCR检测荧光染料的用途。