[发明专利]广谱抗人球蛋白卡的制备方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种用于血型交叉配血、不规则抗体筛查、不规则抗体鉴 定的微柱凝胶血型卡及其应用。更具体的说，本发明涉及一种广谱抗人球 蛋白卡的组成、制备方法及其应用，涉及输血医学领域。

(二)背景技术

微柱凝胶抗球蛋白卡是近来逐渐兴起的一项免疫检测新方法，是不完 全抗体与相应抗原的红细胞，在含有抗人球蛋白凝胶介质中进行的抗人球 蛋白的试验，该法是凝胶柱与抗人球蛋白实验检测法相结合的产物，1984 年法国Dr.YvesLapierre首先发明此方法，与传统试管法抗球蛋白试验比较， 省略了传统的试管液体介质的繁琐洗涤程序，也省去了必须在阴性结果试 管中加入不完全抗体致敏的红细胞，以确认阴性结果是否正确的步骤，因 此具有标本用量少、操作简便、省时、人为因素小、易于标准化及自动化、 结果易判读并可长期保存等优点，适于大批量标本的检测。

在国外微柱凝胶抗球蛋白卡已成为常规广泛应用于血型鉴定、不规则 抗体检测及交叉配血等各种血型血清学试验。近年来，国内已开始采用进 口微柱凝胶抗球蛋白卡进行不规则抗体的筛选和鉴定、致敏红细胞的检测 等，但由于其售价高、设备昂贵，严重影响其在国内普及。另国内亦有微 柱凝胶蛋白卡的生产，但国内外采用的凝胶为葡聚糖凝胶，此凝胶的颗粒 大小为70纳米以上，颗粒较大，凝胶之间的缝隙较大，从而使得其检测的 灵敏度降低。

(三)发明内容

本发明的目的在于克服上述不足，提供一种灵敏度高、特异性好且质 量稳定的广谱抗人球蛋白卡的制备方法。

本发明的目的是这样实现的：一种广谱抗人球蛋白卡的制备方法，所 述卡上具有6个微柱凝胶管，所述6个微柱凝胶管皆为含有抗IgG+C₃d抗 体的凝胶管，所述方法包括以下工艺过程：

步骤一、凝胶悬浮介质的配制

所述凝胶悬浮介质配方如下：

对羟基苯甲酸甲酯    (5.5-6.5)×10^-4g/ml

对羟基苯甲酸丙酯    (1.0-1.5)×10^-4g/ml

甘氨酸              (1.6-1.9)×10^-2g/ml

氯化钠              (1.7-1.8)×10^-3g/ml

磷酸二氢钾          (2.1-2.4)×10^-4g/ml

磷酸氢二钠          (4.6-4.8)×10^-4g/ml

牛血清白蛋白        ≤2％，

以上试剂用蒸馏水溶解，调pH值为6.6-6.8；

步骤二、凝胶的制备

选用聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶，颗粒大小为30-60纳米，用步骤一配制 的凝胶悬浮介质浸泡后再用该凝胶悬浮介质洗涤3-5次，除去凝胶破损碎 片以及聚集的凝胶颗粒，收集得到颗粒大小均匀的、且完整呈球形的适用 的凝胶。

步骤三、抗体的选择

选择广谱抗人球蛋白试剂(抗IgG+C₃d)，

其中抗IgG成分灵敏度：要求按照体积比1∶2和体积比1∶4稀释的IgG 抗人球蛋白血清必须对照体积比1∶16稀释的抗D IgG致敏的红细胞有肉 眼可见凝集，

抗C₃d成分的灵敏度：要求：按照体积比1∶2和体积比1∶4稀释的抗人 球蛋白试剂(抗IgG+C₃d)必须对C₃d致敏的红细胞有肉眼可见凝集，与 所述广谱抗人球蛋白试剂原液的反应强度≥1+，

广谱抗人球蛋白试剂(抗IgG+C₃d)与IgG性质抗D致敏红细胞产生 阳性反应，与C₃d致敏红细胞产生阳性反应，与既无IgG抗体又无C₃d抗 体致敏的红细胞反应为阴性；

步骤四、凝胶的配制

将步骤二制备的凝胶与步骤三选择的抗体按照体积比2∶1～3∶1的比例 混合，配制成含有广谱抗人球蛋白试剂(抗IgG+C₃d)的凝胶，

步骤五、分装