[发明专利]一种含有枯草芽孢杆菌的多功能生物制剂

说明书

技术领域

本发明为含有枯草芽孢杆菌的多功能生物制剂，涉及土壤改良和抗重茬剂的配方和制备方法。 

背景技术

良好的土壤条件是作物丰产的必要条件，但是由于气候干旱，化肥过度使用，不合理的栽培和管理，连作等原因引起土壤生态恶化，作物减产，造成了巨大的经济损失。土壤生态的恶化对作物的影响主要是土壤板结引起的根系水、汽、肥失衡和重茬病原菌引起的重茬病害。探索有效地方法打破土壤板结，控制重茬病害具有巨大的经济效益和社会意义。 

目前，打破土壤板结的方法主要是机械深耕和施用土壤改良剂。机械深耕是利用大马力农业机械，翻耕土壤厚度达到60cm以上，疏松硬化的土壤，重构团粒结构，提高土壤肥力，保水保墒，这种方法无污染，不破坏有益菌群。缺点是土壤翻动量大，容易形成高低垄，影响土壤平整度，并且劳动强度大，成本高。施用土壤改良剂能够有效改良土壤团粒结构，起到通风通气、保水保墒的作用。土壤改良剂包括人工合成改良剂和天然改良剂。聚丙烯酰胺，沥青乳剂等人工合成改良剂成本高，持续时间短，对生态环境有不利影响。天然改良剂如多聚糖、腐殖酸、泥炭具有同样的改良效果，但成本相对要低，绿色化环保，具有明显的优势。 

抗重茬病害主要方法有：高温处理，化学药剂处理，微生物菌剂处理。高温处理是通过覆盖地膜等方式提高土壤温度(40-50℃，15天)达到杀灭病原菌的效果。此法只能对地表进行浅层灭菌，对深层土壤没有显著效果。化学药剂处理的方法，以氯化苦和溴甲烷使用较多，优点是对土壤病原菌的毒性强，效果显著。缺点是对环境造成不利影响，在杀灭病原菌的同时，将土壤中的有益菌群破坏，对作物生长不利，对人畜有毒害作用。微生物杀菌剂通过外施生防菌，固氮、解磷、解钾等有益菌种，利用微生物间的竞争，拮抗，重寄生等作用，抑制或杀灭病原菌，保护并促进植物根系生长，提高土壤肥力。是一种高效环保的抗重茬病害的方法。 

土壤的板结与重茬病害往往是相伴而生的，但是目前还没有一种有效的方法，同时具备土壤改良和重茬病害防治的效果。 

发明内容

本发明目的在于提供一种结合了天然土壤改良剂的土壤改良效果和微生物土壤杀菌剂防治重茬病害效果的多功能生物制剂。其效果在于(1)利用生防微生物阻断有害菌群侵染植物并杀灭病原菌，诱导植物产生抗病性，防死苗烂棵；(2)利用微生物与黄腐酸成分的复合增效作用，诱导根系生长，实现生根壮苗，增强抗病能力；(3)利用微生物与黄腐酸、硫酸锌的复合增效作用，打破土壤板结，形成团粒结构，实现免深耕作，保水保墒、缓解肥害、提高地力。 

为了实现上述目的，本发明提供了一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)DLD2菌株。 

所述枯草芽孢杆菌DLD2菌株是从山东寿光菜园土壤中分离，使用牛肉膏、蛋白胨培养基，利用涂布平板法培养筛选得到的，命名为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)DLD2，该菌种已于2009年8月12日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏，编号为CGMCC NO.3222，地址为北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所。 

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)DLD2有以下特征： 

单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。最适生长温度为28℃。 

枯草芽孢杆菌发酵液的制备方法如下： 

将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)DLD2菌种经LB平板活化，接到液体LB培养基中，进行摇床培养；再接种进入种子罐、二级种子罐、发酵罐中搅拌通气发酵培养；然后进入乳化罐中乳化、包埋，再进入双效浓缩器浓缩制得枯草芽孢杆菌培养物，即为枯草芽孢杆菌发酵液。菌液中菌含量达到1×10⁹-3×10¹⁰/ml。 

具体制备方法为： 

枯草芽孢杆菌种子培养： 

将枯草芽孢杆菌菌种经LB平板活化，再接到液体LB培养基(胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，NaCl 10g/L)中，在28℃、转速120rpm下，摇床培养24h。 

枯草芽孢杆菌的发酵方法：